Diferencia clave: tripsinización tibia y fría
La tripsinización en caliente y en frío son dos métodos utilizados en la desagregación enzimática de células en el cultivo de células animales. La diferencia clave entre la tripsinización en caliente y en frío, como sugieren los nombres, depende de la temperatura a la que se agrega la tripsina para la desagregación celular. La tripsinización en caliente tiene lugar en condiciones de temperatura más alta (36,5 – 37 0C), mientras que la tripsinización en frío tiene lugar en condiciones de temperatura baja.
Durante el proceso de cultivo celular primario de células animales, se utilizan tres métodos principales que han demostrado ser exitosos. Los tres métodos incluyen la desagregación mecánica de células, la desagregación enzimática de células y la técnica de explante primario. La desagregación enzimática de las células conduce al aislamiento de las células y se realiza mediante la enzima tripsina que degrada proteínas. Por lo tanto, este proceso se conoce como tripsinización. La tripsinización se puede realizar en dos condiciones diferentes, a saber, la tripsinización en caliente y la tripsinización en frío. La tripsinización en caliente es el método de tratar las células con tripsina en condiciones cálidas a una temperatura de 36,5 – 37 0C. La tripsinización en frío es el proceso de tratamiento con tripsina que tiene lugar en condiciones más frías, preferiblemente en hielo manteniendo temperaturas muy bajas.
¿Qué es la tripsinización en caliente?
La tripsinización se puede realizar para desagregar los componentes celulares a fin de aislar las células para producir un cultivo celular primario. La tripsina es una enzima de degradación de proteínas y la mezcla de enzimas utilizada en la tripsinización puede ser un extracto crudo o un producto purificado. Se dice que el extracto crudo es más eficiente en la lisis de proteínas y la desintegración celular, ya que contiene otras enzimas degradantes.
La tripsinización en caliente es el método enzimático más utilizado para la desagregación celular que tiene lugar en condiciones de temperatura más alta. Previamente al tratamiento por tripsinización, el tejido deseado se trocea en trozos más pequeños. Facilita el fácil proceso de desagregación. A continuación, el tejido picado se lava en un medio especial conocido como medio de sal basal de disección.
Al finalizar el paso de lavado, las células se transforman en un matraz que contiene la enzima activa, que es la tripsina. Como esta técnica implica un protocolo de tripsinización en caliente, la tripsina se coloca a una temperatura de unos 37 0C durante unas cuatro horas.
Figura 01: Tripsina
El contenido se mezcla y se agita utilizando métodos de centrifugación para facilitar el protocolo y acelerar el proceso de desagregación. Una vez que se alcanza el tiempo recomendado, las células se pueden derivar del sobrenadante. A continuación, las células derivadas del sobrenadante se incuban a una temperatura y un tiempo determinados.
¿Qué es la tripsinización en frío?
La tripsinización en frío es el otro tipo de tripsinización que tiene lugar en condiciones de frío. En esta técnica, las células que se cortan y se lavan se colocan en viales en hielo y luego se sumergen en tripsina. El período de remojo es mucho más largo: entre 6 y 24 horas.
Después de completar el procedimiento de remojo, la tripsina se elimina del lisado celular y las piezas de tejido se incuban a 37 0C durante aproximadamente 20 a 30 minutos. La disgregación de las células se lleva a cabo pipeteando repetidamente la mezcla de tejidos. Esto permitirá que las células se disocien de la membrana y pasen al sobrenadante. Una vez que las células están en el sobrenadante, se incuban y cultivan a la temperatura y el período de tiempo deseados.
El método de tripsinización en frío tiene varias ventajas
- Mayor rendimiento de células viables ya que se minimiza el daño celular. El daño celular se minimiza al no utilizar pasos de centrifugación.
- Método muy conveniente.
- Menos laborioso.
La principal limitación del método de tripsinización en frío es que no se pueden usar grandes cantidades en un solo caso.
¿Cuáles son las similitudes entre la tripsinización en caliente y en frío?
- Tanto los procesos de tripsinización en frío como en caliente utilizan la enzima tripsina para la desagregación de las células.
- Tanto los procesos de tripsinización en frío como en caliente se utilizan en los procedimientos de cultivo celular para la desagregación de las células.
- En los procedimientos de tratamiento de tripsinización en frío y en caliente, las células se derivan del sobrenadante.
¿Cuál es la diferencia entre la tripsinización en frío y en caliente?
Tripsinización tibia versus fría |
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| La tripsinización en caliente es el método de tratar las células con tripsina en condiciones cálidas a una temperatura de 36,5 a 37 °C 0. | La tripsinización en frío es el proceso de tratamiento con tripsina que tiene lugar en condiciones más frías, preferiblemente en hielo manteniendo temperaturas muy bajas. |
| Protocolo | |
| Los trozos de tejido cortados se mantienen a 37 0C continuamente durante todo el procedimiento. | Los trozos de tejido cortados se mantienen inicialmente a temperaturas heladas y luego se mantienen a 37 °C 0. |
| Temperatura | |
| La tripsinización en caliente ocurre en 36.5 – 37 0 | La tripsinización en frío ocurre a temperaturas heladas. |
| Tiempo consumido | |
| Menor tiempo requerido para todo el proceso (alrededor de 4 horas) de tripsinización en caliente. | Se requiere más tiempo (alrededor de 6 a 24 horas) para la tripsinización en frío. |
| Rendimiento de células viables | |
| Baja en tripsinización en caliente. | Alto contenido de tripsinización en frío. |
| Uso de la centrifugación | |
| Se requiere centrifugación para la desagregación de las células en la tripsinización en caliente. | La centrifugación no es necesaria en la tripsinización en frío. |
| Cantidad inicial de tejido para la tripsinización | |
| Se puede utilizar una mayor cantidad de tejido en la tripsinización en caliente. | Se puede utilizar una cantidad menor de tejido en la tripsinización en frío. |
| Daño celular | |
| Alto debido a la centrifugación en tripsinización en caliente. | Menos debido a la tripsinización en frío. |
Resumen: tripsinización tibia frente a fría
La tripsinización es el método de uso de la enzima tripsina que degrada proteínas para la desagregación y preparación de cultivos celulares primarios durante el proceso de cultivo celular. Existen dos técnicas principales de tripsinización basadas en las temperaturas utilizadas durante el procedimiento. Son tripsinización caliente y fría. La tripsinización en caliente se lleva a cabo a 37 °0C, mientras que la tripsinización en frío se lleva a cabo en condiciones heladas. Aunque la tripsinización en frío tarda más tiempo en completarse, se dice que tiene un mayor rendimiento de células viables. Esto se debe al hecho de que el daño celular se minimiza en la tripsinización en frío, ya que no utiliza pasos de centrifugación vigorosos. Esta es la diferencia entre la tripsinización en caliente y en frío.
