Diferencia clave: electroforesis en gel horizontal y vertical
La electroforesis en gel es una técnica de laboratorio utilizada en genética para separar mezclas que contienen ADN, ARN y otras proteínas según su carga y tamaño molecular respectivos. El ADN, el ARN o las proteínas que deben separarse en este método se pasan a través de un gel que contiene pequeños poros. Las moléculas son impulsadas a través del gel por un campo eléctrico. Las moléculas pasan a través de los poros del gel y la velocidad del movimiento es inversamente proporcional a sus respectivas longitudes. Por lo tanto, las moléculas con menor tamaño molecular se moverán más rápido que las moléculas con mayor peso molecular. El campo eléctrico es generado por la diferencia de carga en dos extremos del gel. Un extremo contiene una carga positiva y el otro extremo contiene una carga negativa. Dado que las moléculas de ADN y ARN están cargadas negativamente, serán atraídas hacia el extremo cargado positivamente del gel. La electroforesis en gel puede ser de dos métodos diferentes: electroforesis en gel horizontal y electroforesis en gel vertical. En la electroforesis en gel horizontal, el gel está presente en una orientación horizontal y está sumergido en un tampón de funcionamiento continuo que está presente dentro de la propia caja de gel. En la electroforesis en gel vertical, el sistema tampón está orientado verticalmente y es discontinuo con dos cámaras en la parte superior e inferior con un cátodo y un ánodo, respectivamente. Esta es la diferencia clave entre la electroforesis en gel horizontal y vertical.
¿Qué es la electroforesis en gel horizontal?
La electroforesis en gel horizontal utiliza la teoría básica para la separación de moléculas de ADN, ARN o proteínas según su respectivo tamaño molecular y carga. En esta técnica, el gel está presente en una orientación horizontal y está sumergido en un tampón que es continuo. Se utiliza gel de agarosa para separar la caja de gel en dos compartimentos. Un extremo de la caja de gel contiene un ánodo mientras que el otro extremo contiene un cátodo. Cuando se aplica una corriente, el amortiguador utilizado en esta técnica permite la creación de un gradiente de carga. Cuando se aplica la carga, el gel tiende a calentarse. El tampón también funciona como refrigerante, lo que mantiene la temperatura en niveles óptimos. La recirculación del tampón de funcionamiento evita la formación de un gradiente de pH. No se puede utilizar un sistema de tampón discontinuo en la electroforesis en gel horizontal ya que los dos compartimentos del sistema de gel se conectan con el tampón en funcionamiento. La acrilamida se utiliza durante la electroforesis en gel para separar mezclas de proteínas.
Figura 01: Electroforesis en gel horizontal
En la electroforesis en gel horizontal, no se puede utilizar acrilamida ya que la caja de gel está expuesta al oxígeno. Debido a la presencia de oxígeno, se inhibe la polimerización de la acrilamida, y esto interfiere con la formación del gel. La electroforesis en gel horizontal es un método sin esfuerzo que se utiliza en la separación de ADN y ARN.
¿Qué es la electroforesis vertical en gel?
La técnica de electroforesis en gel vertical funciona de acuerdo con la teoría principal de la electroforesis en gel, pero se considera más compleja que el método de electroforesis en gel horizontal. Esta técnica utiliza un tampón discontinuo. Un cátodo está ubicado en la cámara superior y el ánodo está ubicado en la cámara inferior. Los electrodos presentes en cada compartimento proporcionan el campo eléctrico requerido. Se vierte una fina capa de gel entre las dos placas de vidrio montadas. Por lo tanto, la parte superior del gel se sumerge en la cámara superior y la parte inferior del gel se sumerge en la cámara del fondo. Una vez que se aplica la corriente, una pequeña porción del tampón se mueve a la cámara inferior desde la cámara superior a través del gel. La corriente aplicada en esta técnica es de unidades de minuto.
Figura 02: Electroforesis en gel vertical
En la electroforesis en gel vertical, el tampón solo fluye a través del gel. Esto permite un control preciso del gradiente de voltaje durante la etapa de separación. Se puede utilizar gel de acrilamida ya que los compartimentos no están expuestos al oxígeno atmosférico. Debido al tamaño de poro más pequeño del gel de acrilamida, se puede lograr una separación precisa con una resolución más alta.
¿Cuáles son las similitudes entre la electroforesis en gel horizontal y vertical?
- Ambos sistemas funcionan según la teoría básica de la electroforesis en gel.
- El ánodo y el cátodo se utilizan para proporcionar el campo eléctrico necesario en ambos sistemas.
¿Cuál es la diferencia entre electroforesis en gel horizontal y vertical?
Electroforesis en gel horizontal frente a vertical |
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| La electroforesis en gel horizontal es una técnica de electroforesis en gel en la que el gel está presente en una orientación horizontal. | La electroforesis en gel vertical es una técnica de electroforesis en gel en la que el gel se orienta verticalmente. |
| Búfer | |
| La electroforesis en gel horizontal consiste en un tampón continuo. | El tampón de ejecución es discontinuo en la electroforesis en gel vertical. |
| Uso de acrilamida | |
| La acrilamida no se puede utilizar para la electroforesis en gel horizontal ya que la caja de gel está expuesta al oxígeno atmosférico. | Dado que el gel no está expuesto al oxígeno atmosférico debido a las dos cámaras separadas, la acrilamida podría utilizarse para la electroforesis en gel vertical. |
| Función | |
| La electroforesis en gel horizontal se usa más a menudo para la separación de mezclas de ADN y ARN, pero no de proteínas. | La electroforesis en gel vertical se utiliza para separar mezclas de proteínas. |
Resumen: electroforesis en gel horizontal frente a vertical
La electroforesis en gel es una técnica de laboratorio ampliamente utilizada en la separación de mezclas que contienen moléculas de ADN, ARN y proteínas. Hay dos métodos de electroforesis en gel: electroforesis en gel horizontal y vertical. En la electroforesis en gel horizontal, el tampón de ejecución es continuo, mientras que en la electroforesis en gel vertical es discontinuo. Esta es la diferencia entre la electroforesis en gel horizontal y vertical. Ambos sistemas funcionan según el principio común de la electroforesis en gel.
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