Diferencia clave: ADNc frente a biblioteca genómica
Hay dos tipos principales de bibliotecas de ADN construidas por científicos utilizando técnicas de ingeniería genética. Esas son la biblioteca de ADNc y la biblioteca genómica. La diferencia clave entre el ADNc y la biblioteca genómica es que la biblioteca de ADNc contiene el ADN complementario clonado del ARNm total de un organismo, mientras que la biblioteca de ADN genómico contiene los fragmentos clonados del genoma completo de un organismo. La biblioteca de ADN genómico es más grande que la biblioteca de ADNc.
¿Qué es una biblioteca genómica?
Una biblioteca de ADN genómico es una colección de clones que contienen los fragmentos del ADN genómico total de un organismo. Contiene todo el ADN genómico de ese organismo, incluidas las secuencias codificantes y no codificantes. La construcción de una biblioteca genómica se realiza mediante tecnología de ADN recombinante seguida de clonación (ingeniería genética). Hay diferentes pasos involucrados en la construcción como se muestra en la figura 01. El proceso comienza con el aislamiento del ADN genómico. Utilizando un protocolo de extracción de ADN adecuado, debe aislarse el ADN genómico total de un organismo. Luego, el ADN debe convertirse en tamaños manejables o en fragmentos específicos mediante endonucleasas de restricción (enzimas de corte de ADN). El ADN fragmentado debe insertarse en vectores usando ligasas de ADN (enzimas de unión de ADN). Un vector es un organismo autorreplicante. Los plásmidos y los bacteriófagos son vectores comúnmente utilizados en la tecnología del ADN recombinante. Estos vectores ligados se conocen como moléculas de ADN recombinante ya que llevan secuencias de ADN tanto propias como insertadas. Los vectores recombinantes se añaden a una bacteria huésped y se hacen para captar los vectores recombinantes dentro de la célula bacteriana. Las bacterias con vectores recombinantes (plásmidos) deben cultivarse en un medio de cultivo. Durante la multiplicación bacteriana, el ADN bacteriano, junto con los plásmidos recombinantes, replican sus genomas y producen clones. Estos clones contienen el genoma completo del organismo fuente. Por lo tanto, se llama una biblioteca genómica. Los plásmidos se pueden separar fácilmente del ADN cromosómico bacteriano para construir la biblioteca genómica de ese organismo. Si un organismo en particular contiene genes interesados, es fácil detectarlo en la biblioteca genómica mediante hibridación usando sondas moleculares (marcadores).
Las bibliotecas genómicas son importantes para estudiar la estructura y función genómica, genes específicos, ubicación de genes, mapeo de genes, mutaciones, secuenciación de genes, identificación de nuevos genes terapéuticos, etc.
Figura_1: Construcción de una biblioteca genómica
¿Qué es una biblioteca de ADNc?
Una biblioteca de ADNc es una colección de clones de ADN complementario (ADNc) sintetizados a partir del ARNm total de un organismo. El procedimiento de construcción implica diferentes pasos. La purificación del ARNm total de un organismo es el primer paso involucrado. El ARNm aislado se convierte en hebras de ADNc mediante un proceso llamado transcripción inversa. La transcripción inversa es facilitada por una enzima llamada transcriptasa inversa. Utiliza un cebador 3' pequeño e inicia la síntesis de la primera cadena de ADNc complementaria a la cadena de ARNm molde. El ADNc de doble cadena resultante se convierte en fragmentos más pequeños utilizando endonucleasas de restricción y se inserta en vectores adecuados. Estas moléculas recombinantes construidas luego se agregan a un organismo huésped y se cultivan en un medio de cultivo para producir clones. La colección de clones que contienen fragmentos de ADNc de un organismo se conoce como biblioteca de ADNc. El ARNm maduro completamente cortado no contiene intrones ni regiones reguladoras. Por lo tanto, los fragmentos no codificantes no están presentes en las bibliotecas de cDNA a diferencia de una biblioteca genómica.
Las bibliotecas de cDNA son importantes para el análisis de regiones codificantes, funciones de genes, expresión de genes, etc.
Figura_2: Construcción de una biblioteca de ADNc
¿Cuál es la diferencia entre el ADNc y la biblioteca genómica?
ADNc frente a biblioteca genómica |
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| La biblioteca de ADNc es una colección de clones que contienen el ADN complementario al ARNm de un organismo | La biblioteca genómica es una colección de clones que contienen el ADN genómico total de un organismo. |
| Secuencias de codificación frente a no codificación | |
| La biblioteca de cDNA contiene solo las secuencias de codificación; no contiene intrones. | La biblioteca genómica consta de todo el ADN genómico, incluido el ADN no codificante (intrones y regulador). |
| Tamaño | |
| La biblioteca de ADNc es pequeña. | La biblioteca genómica es grande. |
| Material de partida | |
| El material de partida es ARNm | El material de partida es el ADN. |
| Implicación de la transcripción inversa. | |
| La transcripción inversa ocurre en la síntesis de la primera cadena de ADNc. | La transcripción inversa no ocurre. |
Resumen: ADNc y biblioteca genómica
La biblioteca genómica representa una población de clones que contienen el ADN genómico total fragmentado de un organismo. La biblioteca de ADNc representa la población de clones que contienen ADN complementario del ARNm total de un organismo. Un clon de ADNc contiene solo las secuencias que se encuentran en el ARNm, mientras que el clon genómico contiene las secuencias de todo el genoma. Esta es la diferencia entre el ADNc y la biblioteca genómica.
