La diferencia clave entre la secuenciación de nanoporos e illumina es que la secuenciación de nanoporos es una técnica de secuenciación de tercera generación que usa un nanoporo para detectar la secuencia de una molécula de ADN, mientras que la secuenciación de illumina es una técnica de secuenciación de segunda generación que usa tecnología de terminadores de colorante para detectar la secuencia de una molécula de ADN.
La secuenciación del ADN es la determinación de una secuencia precisa de nucleótidos o bases de una molécula de ADN. Hay muchos métodos rápidos para determinar las secuencias de ácidos nucleicos que aceleran los descubrimientos de la investigación biológica y médica. Una de las primeras técnicas de secuenciación de ADN (secuenciación de Sanger) fue desarrollada por Frederick Sanger en 1975 mediante la adopción de una estrategia de extensión de cebadores en el Centro MRC, Cambridge, Reino Unido. Hoy en día, la mayoría de las técnicas de secuenciación rápida de ADN pertenecen a las categorías de secuenciación de ADN de segunda generación (próxima generación) y tercera generación. La secuenciación de nanoporos e illumina son dos de estas nuevas tecnologías de ADN.
¿Qué es la secuenciación de nanoporos?
La secuenciación de nanoporos es una técnica de secuenciación de tercera generación que utiliza un nanoporo de proteína para detectar la secuencia de ácido nucleico de una molécula de ADN. En la secuenciación de nanoporos, el ADN que pasa a través del nanoporo cambia su corriente. Este cambio depende de la forma, el tamaño y la longitud de la secuencia de ADN. La señal resultante se decodifica para obtener la secuencia específica de ADN o ARN. Este método no requiere nucleótidos modificados y funciona en tiempo real.
Figura 01: Secuenciación de nanoporos
Oxford Nanopore Technologies es una empresa popular que fabrica numerosos dispositivos de secuenciación de nanoporos. La mayoría de los dispositivos de secuenciación Oxford Nanopore tienen celdas de flujo. Esta celda de flujo tiene varios nanoporos diminutos que están incrustados en una membrana electrorresistente. Cada nanoporo corresponde a su propio electrodo. Este electrodo se conecta a un canal y un chip sensor. Este electrodo mide la corriente eléctrica que fluye a través del nanoporo. Cuando una molécula pasa a través de un nanoporo, su corriente cambia o se interrumpe. Además, esta interrupción produce un garabato característico. Este garabato se decodifica para determinar la secuencia de ADN o ARN en tiempo real.
¿Qué es la secuenciación de Illumina?
La secuenciación Illumina es una técnica de secuenciación de segunda generación que utiliza tecnología de terminadores de tinte reversibles para detectar la secuencia de moléculas de ADN. La empresa Solexa, que ahora forma parte de la empresa Illumina, se fundó en 1998. Esta empresa inventó este método de secuenciación basado en tecnología de terminadores de colorante reversibles y polimerasas diseñadas.
Figura 02: Secuenciación de Illumina
En el método de secuenciación illumina, la muestra se divide primero en secciones cortas. Por lo tanto, en la secuenciación Illumina, se crean fragmentos o lecturas cortas de 100-150 pb al principio. A continuación, estos fragmentos se ligan a adaptadores genéricos y se templan en un portaobjetos. Se realiza PCR para amplificar cada fragmento. Esto crea un lugar con muchas copias del mismo fragmento. Posteriormente, se separan en monocatenarios y se someten a secuenciación. El portaobjetos de secuenciación contiene nucleótidos marcados con fluorescencia, ADN polimerasa y un terminador. Debido al terminador, solo se agrega una base a la vez. Cada terminador de ciclo se elimina y permite agregar la siguiente base al sitio. Además, a partir de señales fluorescentes, el ordenador detecta la base añadida en cada ciclo. La tecnología de secuenciación de Illumina construye la secuencia en un plazo de 4 a 56 horas.
¿Cuáles son las similitudes entre la secuenciación de Nanopore e Illumina?
- La secuenciación Nanopore e Illumina son dos técnicas de secuenciación.
- Ambos son métodos de secuenciación nuevos y rápidos.
- Se utilizan para detectar secuencias de ADN y ARN.
- Ambos tienen una alta precisión.
¿Cuál es la diferencia entre la secuenciación de Nanopore e Illumina?
La secuenciación de nanoporos es una técnica de secuenciación de tercera generación que utiliza un nanoporo para detectar la secuencia de moléculas de ADN. Por el contrario, la secuenciación Illumina es una técnica de secuenciación de segunda generación que utiliza tecnología de terminadores de colorantes reversibles para detectar la secuencia de moléculas de ADN. o, esta es la diferencia clave entre la secuenciación de nanoporos e illumina. Además, la secuenciación de nanoporos tiene una precisión del 92-97 %, mientras que la secuenciación de Illumina tiene una precisión del 99 %.
La siguiente infografía enumera las diferencias entre la secuenciación de nanoporos e illumina en forma tabular.
Resumen: secuenciación de Nanopore frente a Illumina
Las técnicas de secuenciación de alto rendimiento incluyen métodos de secuenciación de segunda generación (lectura corta) y tercera generación (lectura larga). La secuenciación Nanopore e Illumina son dos nuevas tecnologías de ADN que pertenecen a las categorías de secuenciación de ADN de tercera y segunda generación (próxima generación). La secuenciación de nanoporos utiliza un nanoporo para detectar la secuencia de moléculas de ADN. Por otro lado, la secuenciación Illumina utiliza tecnología de terminadores de tinte reversibles para detectar la secuencia de moléculas de ADN. Por lo tanto, este es el resumen de la diferencia entre la secuenciación de nanoporos e illumina.
