Diferencia clave: inmunofluorescencia frente a inmunohistoquímica
El diagnóstico de enfermedades, que utiliza métodos de biología molecular, se ha convertido en un área emergente de la tecnología de laboratorio clínico. Incluye todas las pruebas y métodos para identificar una enfermedad y comprender la causa de una enfermedad mediante el análisis de ADN, ARN o proteínas expresadas en un organismo. Los rápidos avances en el diagnóstico molecular han permitido la investigación básica sobre enfermedades transmisibles y no transmisibles. Estos se utilizan para determinar cambios en la secuencia o niveles de expresión en genes o proteínas cruciales implicados en enfermedades. La inmunofluorescencia (IF) y la inmunohistoquímica (IHC) son dos de estas técnicas ampliamente utilizadas en la biología del cáncer. IF es un tipo de IHC donde se usa un método de detección de fluorescencia para analizar anticuerpos monoclonales y policlonales, mientras que IHC usa métodos químicos para detectar los anticuerpos monoclonales y policlonales. Esta es la diferencia clave entre IF e IHC.
¿Qué es la inmunofluorescencia (IF)?
La inmunofluorescencia es una técnica de detección en la que los anticuerpos utilizados en el ensayo se marcan con tintes fluorescentes o proteínas fluorescentes con fines de detección. Los anticuerpos secundarios marcados pueden generar señales de fondo no deseadas; por lo tanto, la técnica IF actualmente se basa en marcar el propio anticuerpo primario para evitar señales no deseadas durante la detección. Mediante esta técnica se evita la unión no específica entre el anticuerpo primario y el secundario, y es más rápida ya que no implica un paso de incubación secundario. También se mejora la calidad de los datos.
Figura 01: Tinción de inmunofluorescencia doble para BrdU, NeuN y GFAP
Los fluorocromos o tintes fluorescentes son compuestos que pueden absorber la radiación, preferiblemente la radiación ultravioleta que se excita. Cuando las partículas alcanzan el estado fundamental desde el estado excitado, emiten radiación que es captada y detectada por un detector para formar un espectro. Es de gran importancia que el marcador fluorescente sea compatible y estable para la reacción en particular y debe conjugarse correctamente con el anticuerpo para obtener resultados precisos. Uno de los fluorocromos más utilizados es el isotiocianato de fluoresceína (FITC), que es de color verde, con longitudes de onda pico de absorción y emisión de 490 nm y 520 nm, respectivamente. La rodamina, otro agente utilizado en la FI, es de color rojo y tiene longitudes de onda máximas de absorción y emisión distintas de 553 nm y 627 nm.
¿Qué es la inmunohistoquímica (IHC)?
IHC es un método de prueba molecular practicado para identificar y confirmar la presencia del antígeno en la célula diana. La célula diana podría ser una partícula infecciosa, un patógeno microbiano o una célula tumoral maligna. IHC utiliza anticuerpos monoclonales y policlonales para determinar la presencia de antígenos presentes en la superficie celular de las células diana. La técnica se basa en la unión antígeno-anticuerpo. Un marcador de detección se conjuga con estos anticuerpos para detectar la presencia o ausencia del antígeno particular. Estos marcadores pueden ser marcadores químicos como enzimas, anticuerpos marcados con fluorescencia o anticuerpos radiomarcados.
Figura 02: Corte de cerebro de ratón teñido por inmunohistoquímica
La aplicación más popular de IHC es en biología de células cancerosas para identificar la presencia de tumores malignos, pero también se utiliza para la detección de enfermedades infecciosas.
¿Cuáles son las similitudes entre la inmunofluorescencia y la inmunohistoquímica?
- La inmunofluorescencia y la inmunohistoquímica se realizan en condiciones in vitro.
- Ambas técnicas se basan en el antígeno-anticuerpo
- Ambas son técnicas muy rápidas.
- Los resultados de las técnicas son reproducibles.
- Ambos han mejorado la calidad de los datos.
- Estas técnicas se utilizan en el diagnóstico de cáncer y enfermedades infecciosas.
¿Cuál es la diferencia entre inmunofluorescencia e inmunohistoquímica?
Inmunofluorescencia versus inmunohistoquímica |
|
| IF es una técnica de detección en la que los anticuerpos utilizados en el ensayo se marcan con tintes fluorescentes o proteínas fluorescentes para la detección. | IHC es una técnica de detección en la que los anticuerpos utilizados en el ensayo se marcan con productos químicos o elementos radiactivos para la detección. |
| Precisión | |
| La precisión es mayor en la técnica IF en comparación con la IHC. | La precisión es menor en IHC. |
| Especificidad | |
| SI es más específico. | IHC es menos específico. |
Resumen: inmunofluorescencia frente a inmunohistoquímica
Los mecanismos moleculares han provocado muchos cambios en el campo de la medicina, lo que ha dado lugar a métodos avanzados de análisis molecular que han provocado revoluciones en el campo del diagnóstico. Estas invenciones han conducido a una identificación y confirmación rápidas y precisas de la enfermedad, permitiendo así la administración y producción exitosa de fármacos. Estas técnicas también se utilizan en farmacología para encontrar los objetivos de los fármacos y confirmar las propiedades farmacocinéticas del fármaco durante el metabolismo del fármaco. IF e IHC son dos métodos de diagnóstico que se basan en el concepto de unión de antígeno y anticuerpo, aunque el modo de detección en ambas técnicas difiere. IF usa el principio de fluorescencia para detectar el antígeno e IHC usa el concepto de conjugación química para detectar el antígeno. Esta es la diferencia entre IF e IHC.
Descargue la versión en PDF de inmunofluorescencia frente a inmunohistoquímica
Puede descargar la versión en PDF de este artículo y utilizarlo sin conexión según la nota de la cita. Descargue la versión en PDF aquí Diferencia entre inmunofluorescencia e inmunohistoquímica.
