La diferencia clave entre la inmunofluorescencia directa e indirecta es que la inmunofluorescencia directa usa un solo anticuerpo que actúa contra el objetivo de interés, mientras que la inmunofluorescencia indirecta usa dos anticuerpos para marcar el objetivo de interés.
La inmunofluorescencia o imagen celular es una técnica que se utiliza para marcar un antígeno diana específico con un fluoróforo. Aquí, el fluoróforo es un compuesto químico fluorescente que puede volver a emitir luz tras la excitación de la luz. Cuando un fluoróforo se une al antígeno objetivo, permite la detección de la molécula objetivo en la muestra. Para describirlo con más detalle, cuando un antígeno se une a un anticuerpo específico, se puede conjugar con fluoróforos. Por lo tanto, es fácil detectar la presencia del antígeno objetivo en la muestra cuando se observa bajo el microscopio de fluorescencia.
Además, hay dos tipos de inmunofluorescencia; inmunofluorescencia directa e indirecta. La diferencia entre la inmunofluorescencia directa e indirecta radica principalmente en la cantidad de anticuerpos utilizados y la conjugación del fluoróforo. Es decir, en la inmunofluorescencia directa, el fluoróforo se conjuga directamente con el anticuerpo primario, mientras que en la inmunofluorescencia indirecta, el fluoróforo se conjuga con el anticuerpo secundario.
¿Qué es la inmunofluorescencia directa?
La inmunofluorescencia utiliza anticuerpos para detectar antígenos diana específicos. La inmunofluorescencia directa es uno de los dos tipos de inmunofluorescencia. En la inmunofluorescencia directa, interviene un solo anticuerpo (anticuerpo primario) y el fluoróforo se conjuga directamente con el anticuerpo primario. Al unirse el anticuerpo con el antígeno objetivo, el fluoróforo emite fluorescencia que puede detectarse con un microscopio de fluorescencia.
Figura 01: inmunofluorescencia directa
Sin embargo, la inmunofluorescencia directa es un método costoso ya que los anticuerpos primarios conjugados son costosos en comparación con los anticuerpos secundarios. Sin embargo, no implica un paso adicional por lo tanto, una técnica más corta. Además, las uniones no específicas se reducen en la inmunofluorescencia directa. Por lo tanto, la reactividad cruzada entre especies es baja. Pero en la detección, la sensibilidad de la inmunofluorescencia directa es débil en comparación con la inmunofluorescencia indirecta.
¿Qué es la inmunofluorescencia indirecta?
La inmunofluorescencia indirecta es el segundo tipo de inmunofluorescencia que involucra dos tipos de anticuerpos, como los anticuerpos primarios y secundarios, en el etiquetado del antígeno objetivo. En este método, el fluoróforo se conjuga con el anticuerpo secundario. Por lo tanto, esta técnica implica un paso adicional.
Figura 02: Inmunofluorescencia
Sin embargo, la sensibilidad es alta en este método ya que se pueden conjugar varios fluoróforos a anticuerpos secundarios y facilita la detección. Además, la inmunofluorescencia indirecta es menos costosa debido a que la conjugación de anticuerpos secundarios es menos costosa y más sencilla. En comparación con la inmunofluorescencia directa, la reactividad cruzada entre especies es alta en el método indirecto.
¿Cuáles son las similitudes entre la inmunofluorescencia directa e indirecta?
- Son dos tipos de técnicas de inmunofluorescencia.
- Los anticuerpos primarios y el fluoróforo se involucran en ambos métodos.
- Además, la reacción antígeno-anticuerpo ocurre en ambos métodos.
- Además, tanto la inmunofluorescencia directa como la indirecta utilizan un microscopio de fluorescencia para la detección del antígeno.
¿Cuál es la diferencia entre inmunofluorescencia directa e indirecta?
La inmunofluorescencia puede ser directa o indirecta según la conjugación del fluoróforo con los anticuerpos utilizados. En la inmunofluorescencia directa, el fluoróforo se conjuga con el anticuerpo primario, que es el único anticuerpo que interviene en esta técnica. En cambio, en la inmunofluorescencia indirecta, el fluoróforo se conjuga con el anticuerpo secundario, que es uno de los dos tipos de anticuerpos que intervienen en la técnica. Por lo tanto, la principal diferencia entre la inmunofluorescencia directa e indirecta es el tipo de anticuerpo que se conjuga con el fluoróforo.
La siguiente infografía proporciona una comparación lado a lado de la diferencia entre la inmunofluorescencia directa e indirecta.
Resumen: inmunofluorescencia directa frente a indirecta
La inmunofluorescencia es una técnica que se utiliza para detectar la presencia de antígenos específicos en una muestra. Esta técnica utiliza anticuerpos específicos. Por tanto, en este, los anticuerpos se conjugan con fluoróforos para detectarlos mediante un microscopio de fluorescencia. Además, hay dos tipos de inmunofluorescencia, a saber, inmunofluorescencia directa e indirecta. La inmunofluorescencia directa involucra un solo anticuerpo y un fluoróforo directamente conjugado con este anticuerpo. La inmunofluorescencia indirecta implica dos anticuerpos; primario y secundario y fluoróforo conjugado con el anticuerpo secundario. Dado que varios anticuerpos secundarios pueden unirse a un anticuerpo primario y varios fluoróforos pueden conjugarse con anticuerpos secundarios, la inmunofluorescencia indirecta es un método más sensible que el método directo. Además, el método indirecto es menos costoso que el método directo. Por lo tanto, esta es la diferencia entre inmunofluorescencia directa e indirecta.
