Diferencia clave: nitrocelulosa frente a PVDF
Western blotting es un método que permite la detección y cuantificación de proteínas específicas de una muestra de proteína. La fiabilidad de la técnica depende de la selección de una membrana correcta para la absorción de proteínas del gel. Existen diferentes tipos de membranas microporosas. Las membranas de nitrocelulosa y PVDF son dos de las preferidas por los investigadores debido a sus atributos especiales sobre los otros tipos de membranas. La selección entre la nitrocelulosa o el PVDF también es otro desafío en el Western Blot. Tanto la nitrocelulosa como el PVDF tienen una alta capacidad de absorción de proteínas. La diferencia clave entre la membrana de nitrocelulosa y la de PVDF es que las membranas de nitrocelulosa no tienen la capacidad de eliminar los anticuerpos y reutilizar la membrana para la reprobación de anticuerpos, mientras que las membranas de PVDF tienen la capacidad de eliminar y reutilizar.
¿Qué es la nitrocelulosa?
La nitrocelulosa es un polímero fabricado mediante el tratamiento de la celulosa con ácido nítrico y se utiliza para fabricar membranas microporosas en biología molecular, especialmente para técnicas de transferencia como la transferencia Southern, Northern y Western. Los tamaños de poro de las membranas de nitrocelulosa oscilan entre 3 y 20 µm. Las membranas microporosas de nitrocelulosa facilitan la detección de reacciones inmunoquímicas que ocurren en la superficie de la membrana. Por lo tanto, las membranas de nitrocelulosa se utilizan con frecuencia para la inmovilización de proteínas y la detección de proteínas específicas en el Western Blot. Las membranas de nitrocelulosa también pueden inmovilizar glicoproteínas y ácidos nucleicos.
Las membranas de nitrocelulosa se prefieren en los ensayos de flujo lateral debido a varias características. Las membranas de nitrocelulosa absorben proteínas en una alta concentración. El disolvente utilizado para humedecer la membrana no disminuye la absorción de proteínas de la membrana de nitrocelulosa. Las membranas de nitrocelulosa se pueden cortar fácilmente al tamaño de gel deseado y transferir proteínas del gel a la membrana mediante transferencia eléctrica o capilar. La nitrocelulosa permite un flujo más rápido de proteínas a través de la membrana con un alto potencial de unión. La nitrocelulosa muestra una mayor resistencia a la manipulación. Otro atributo especial de la membrana de nitrocelulosa es que se puede pegar fácilmente con adhesivos resistentes al agua sin solventes sobre varios soportes de plástico.
Figura 01: Membrana de nitrocelulosa para transferencia Western
¿Qué es PVDF?
El difluoruro de polivinilideno (PVDF) es un fluoropolímero producido por la polimerización del difluoruro de vinilideno y tiene una alta capacidad de inmovilización de proteínas. Por lo tanto, las membranas microporosas hechas de PVDF se utilizan en técnicas de transferencia Western para analizar proteínas específicas de las mezclas de proteínas. Las membranas de PVDF también se pueden utilizar para el análisis de aminoácidos y la secuenciación de proteínas. La característica más importante de la membrana de PVDF sobre la membrana de nitrocelulosa es que se puede quitar fácilmente los anticuerpos y reutilizar para sondas de anticuerpos posteriores.
Las membranas de PVDF son más gruesas que las de nitrocelulosa; por lo tanto, más resistente a los daños durante la reutilización. Las membranas de PVDF son altamente hidrofóbicas. Por lo tanto, deben empaparse en metanol o isopropanol antes de su uso.
¿Cuál es la diferencia entre la nitrocelulosa y el PVDF?
Nitrocelulosa frente a PVDF |
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| La nitrocelulosa es un polímero compuesto de celulosa. | PVDF es un fluoropolímero producido por la polimerización de difluoruro de vinilideno. |
| Tamaño de poro de la membrana | |
| Los tamaños de poro típicos son 0,1, 0,2 o 0,45 μ | Los tamaños de poro típicos son 0,1, 0,2 o 0,45 μm |
| Capacidad de unión a proteínas | |
| La nitrocelulosa tiene una capacidad de unión a proteínas de 80 a 100 μg/cm2. | PVDF tiene una capacidad de unión a proteínas de 170 a 200 μg/cm2. |
| Sensibilidad | |
| Esto tiene una baja sensibilidad en comparación con PVDF. | Esto tiene una alta sensibilidad. |
| Detección de proteínas de baja expresión | |
| Dado que la sensibilidad es baja en las membranas de nitrocelulosa, no es adecuado para la detección de proteínas de baja expresión. | Esto es más adecuado para la detección de proteínas de baja expresión debido a su alta sensibilidad. |
| Ruido de fondo | |
| Esto tiene un ruido de fondo más bajo | Esto tiene un mayor ruido de fondo. |
| Interacciones con proteínas | |
| Las moléculas de proteína se unen a las membranas de nitrocelulosa a través de interacciones hidrofóbicas. | Las proteínas se unen a las membranas de PVDF a través de interacciones hidrofóbicas y dipolares. |
| Naturaleza de la membrana | |
| La nitrocelulosa es quebradiza y frágil. Sin embargo, existen versiones de nitrocelulosa y son resistentes. | PVDF es más duradero y tiene mayor resistencia química. |
| Capacidad de pelar y reutilizar | |
| La nitrocelulosa puede tener dificultades para pelar y reprobar sin perder la señal. | PVDF es ideal para reprobar y secuenciar aplicaciones. |
| Adecuación | |
| La nitrocelulosa es ideal para detectar proteínas de bajo peso molecular. | PVDF es más adecuado para detectar proteínas de mayor peso molecular. |
| Otros usos | |
| La nitrocelulosa se puede utilizar para el análisis de ácidos nucleicos y la transferencia de puntos/ranuras. | PVDF se puede utilizar para la secuenciación de proteínas y sistemas de ensayo en fase sólida. |
| Coste | |
| Esto es más barato que las membranas de PVDF. | Esto es más caro que las membranas de nitrocelulosa. |
| Necesidad de humectación previa | |
| Las membranas de nitrocelulosa no requieren remojo previo con metanol | Las membranas de PVDF requieren un remojo previo con metanol. |
Resumen: nitrocelulosa frente a PVDF
Las membranas de nitrocelulosa fueron las primeras membranas utilizadas comercialmente para el ensayo de flujo lateral. Tienen una alta capacidad de absorción de proteínas. Por lo tanto, las membranas de nitrocelulosa se utilizan en el Western Blot. El PVDF es otro tipo de membrana utilizada en el western blot y también tiene una alta capacidad de absorción de proteínas. Ambos tipos se utilizan en el Western Blot para el análisis de proteínas. Sin embargo, las membranas de PVDF tienen atributos más especiales, lo que las hace más adecuadas que las membranas de nitrocelulosa para el Western Blot. Pero, las membranas de nitrocelulosa son más adecuadas para detectar proteínas de bajo peso molecular, las membranas de PVDF son más adecuadas para detectar proteínas de alto peso molecular. Esta es la diferencia entre las membranas de nitrocelulosa y PVDF.
