La diferencia clave entre la filtración en gel y la cromatografía de afinidad es que la cromatografía de filtración en gel depende de las diferencias en el peso molecular o el tamaño de la muestra del analito, mientras que la cromatografía de afinidad depende de la afinidad de un analito con un ligando inmovilizado.
El término cromatografía en química analítica se refiere al proceso de separación de componentes en una mezcla usando diferentes técnicas. Cromatografía es un nombre colectivo que representa varios métodos diferentes de separación.
¿Qué es la cromatografía de filtración en gel?
La cromatografía de filtración en gel es una técnica analítica en la que la separación de los componentes depende de la diferencia de peso o tamaño molecular. Esta técnica también se conoce como cromatografía de exclusión por tamaño o cromatografía de tamiz molecular. La técnica de separación en este proceso depende de la diferente capacidad de las moléculas de la muestra para entrar en los poros del medio de filtración en gel.
En la técnica de filtración en gel, la fase estacionaria contiene perlas de material hidratado similar a una esponja que tiene poros de dimensiones moleculares que contienen una estrecha gama de tamaños. Si pasamos una solución acuosa que consta de moléculas de varios tamaños a través de una columna que contiene estos "tamices moleculares", las moléculas que son más grandes que los poros del medio de filtración se mueven rápidamente a través de la columna. Por el contrario, las moléculas más pequeñas entran en los poros del gel y tienden a moverse lentamente por la columna. Las moléculas eluyen de la columna en orden decreciente de tamaño molecular. Aquí, el límite de exclusión del gel es la masa molecular de las moléculas más pequeñas que no pueden penetrar los poros de un gel determinado.
Existen diferentes tipos de técnicas de filtración en gel, como el método de filtración indirecta en gel, la filtración en gel de estado estacionario, la diálisis con perlas de gel, etc. La cromatografía de filtración indirecta en gel es útil para determinar las hormonas tiroideas libres. La cromatografía de filtración en gel de estado estacionario es una técnica indirecta útil principalmente para la medición de esteroides libres como el cortisol, la testosterona, etc. La diálisis con perlas de gel, por otro lado, es una modificación de la filtración en gel de estado estacionario que es comparativamente más simple.
¿Qué es la cromatografía de afinidad?
La cromatografía de afinidad es una técnica analítica y un método de separación que depende de una interacción de unión específica entre un ligando inmovilizado y su compañero de unión. Algunos ejemplos incluyen unión anticuerpo-antígeno, unión enzima-sustrato y unión enzima-inhibidor. Por lo tanto, esta técnica tiene muchas aplicaciones importantes en la purificación de ácidos nucleicos, la purificación de proteínas a partir de extractos celulares y la purificación a partir de sangre.
En esta técnica, la propiedad más importante es la inmovilización del ligando. Para ello podemos utilizar diversos materiales como acrilatos y gel de sílice. Es importante evitar la interferencia estérica de la molécula diana con el ligando. Además, un inhibidor se une a la fase sólida. Llamamos a este inhibidor un espaciador. Clásicamente, un espaciador consta de una cadena de hidrocarburo.
La fase estacionaria de la cromatografía de afinidad contiene el núcleo, el espaciador y el ligando. A veces, también tiene un ion metálico que se acopla al ligando. La fase sólida más preferida para la fase estacionaria en esta técnica es el gel de agarosa porque se dispensa fácilmente para llenar y empaquetar la columna con lechos de resina de cualquier tamaño, y es lo suficientemente grande para que las biomoléculas fluyan libremente hacia y a través de las perlas. Los ligandos pueden unirse covalentemente al polímero de perlas de varias formas. Los compuestos espaciadores más comunes son el bromuro de cianógeno, el epóxido, el epóxido con ácido C6 y la diamina. Por otro lado, el ligando que podemos utilizar difiere según la diana, por ejemplo, anticuerpo-antígeno, iones de hierro o aluminio-fosfoproteínas, avidina-biotina, glutatión-GST, quelante-proteínas marcadas con His, etc.
¿Cuál es la diferencia entre la filtración en gel y la cromatografía de afinidad?
La cromatografía es una técnica analítica importante. La cromatografía de filtración en gel y la cromatografía de afinidad son dos variaciones importantes de la cromatografía. La diferencia clave entre la filtración en gel y la cromatografía de afinidad es que la cromatografía de filtración en gel depende de las diferencias en el peso molecular o el tamaño de la muestra del analito, mientras que la cromatografía de afinidad depende de la afinidad de un analito con un ligando inmovilizado.
Resumen: filtración en gel frente a cromatografía de afinidad
Existen diferentes tipos de técnicas cromatográficas según su aplicación y la naturaleza de la muestra del analito. La filtración en gel y la cromatografía de afinidad son dos de estos tipos de técnicas. La diferencia clave entre la filtración en gel y la cromatografía de afinidad es que la cromatografía de filtración en gel depende de las diferencias en el peso molecular o el tamaño de la muestra del analito, mientras que la cromatografía de afinidad depende de la afinidad de un analito con un ligando inmovilizado.
