La diferencia clave entre FPLC y HPLC es que FPLC es un tipo de cromatografía líquida que purifica biomoléculas grandes como proteínas, nucleótidos y péptidos, mientras que HPLC es un tipo de cromatografía líquida que separa compuestos de peso molecular pequeño.
La cromatografía líquida es una técnica utilizada para separar una muestra en sus componentes individuales. Esta separación ocurre debido a la interacción de muestras específicas con las fases móvil y estacionaria. Los componentes dentro de una muestra se separan según la afinidad de cada componente por la fase móvil en la cromatografía líquida. A medida que la fase móvil y la muestra pasan a través de una columna, los componentes de la muestra comienzan a separarse en bandas que pueden detectarse mediante espectroscopia UV-VIS. Por lo tanto, FPLC y HPLC son dos tipos de técnicas de cromatografía líquida.
¿Qué es la FPLC?
FPLC es un tipo de cromatografía líquida que purifica biomoléculas grandes como proteínas, nucleótidos y péptidos. La cromatografía líquida rápida de proteínas (FPLC) fue desarrollada y comercializada por primera vez en Suecia por la empresa Pharmacia en 1982. A menudo se utiliza para analizar o purificar mezclas de proteínas. Esto se lleva a cabo según el principio de las afinidades de los componentes de la muestra por el fluido en movimiento (fase móvil) y un material sólido poroso (fase estacionaria). En FPLC, la fase móvil es un tampón y la fase estacionaria es una resina compuesta de perlas. Por lo general, consiste en agarosa reticulada empaquetada en una columna cilíndrica de vidrio o plástico.
Figura 01: Aparato FLPC (cromatografía líquida rápida de proteínas)
En la mayor parte de la estrategia FLPC, se utiliza resina de intercambio iónico. Por lo tanto, la proteína de interés se unirá a la resina mediante una interacción de carga. La técnica FLPC también utiliza dos tampones: el tampón 1 (el tampón de ejecución) y el tampón 2 (el tampón de elución). Inicialmente, cuando se ejecuta el tampón y la mezcla de muestra a través de la columna, la proteína de interés en la mezcla se unirá a la resina mediante una interacción de carga. Pero la proteína de interés se disocia y vuelve a la solución en el tampón de elución cuando el tampón de elución pasa por la columna al final del proceso. Posteriormente, la solución (eluyente que contiene la proteína de interés) pasa por dos detectores, que miden la concentración de sal y la concentración de proteína. A medida que se eluye cada proteína, aparece como un "pico" durante la detección y se puede recolectar para su uso posterior.
¿Qué es HPLC?
HPLC es un tipo de cromatografía líquida que separa compuestos de bajo peso molecular. En 1969, Waters Corporation, EE. UU., fabricó comercialmente la primera HPLC. En la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), una mezcla de muestra (analito) en un solvente (fase móvil) se bombea a través de una columna con material de relleno cromatográfico (fase estacionaria) a alta presión. La mezcla de muestra es transportada por una corriente de gas portador en movimiento de helio o nitrógeno.
Figura 02: HPLC (cromatografía líquida de alta resolución)
Los componentes de la mezcla de muestra que tienen la menor cantidad de interacción con la fase estacionaria o la mayor cantidad de interacción con la fase móvil saldrán de la columna más rápido. Por otro lado, los componentes de la mezcla de muestra que tienen la mayor cantidad de interacción con la fase estacionaria o la menor cantidad de interacción con la fase móvil saldrán de la columna más lentamente. Según el principio de interacción anterior, los componentes de la mezcla de muestra se pueden separar. Además, el detector del instrumento identifica cada componente de la mezcla de muestra que sale de la columna. La HPLC se utiliza para inspeccionar muestras ambientales y biológicas en busca de presencia o ausencia de compuestos conocidos, como medicamentos, toxinas o pesticidas. Se utiliza en diferentes industrias como la farmacéutica, medioambiental, forense y química.
¿Cuáles son las similitudes entre FPLC y HPLC?
- FPLC y HPLC son tipos de cromatografía líquida.
- Ambos se utilizan para separar e identificar muestras biológicas.
- Tienen una fase móvil líquida y una fase estacionaria sólida.
- Ambas técnicas utilizan una columna para pasar la muestra.
- Estas técnicas utilizan bombas, detectores, válvulas y software para la separación y detección de muestras.
¿Cuál es la diferencia entre FPLC y HPLC?
FPLC es un tipo de cromatografía líquida que se utiliza para purificar biomoléculas grandes como proteínas, nucleótidos y péptidos. HPLC es un tipo de cromatografía líquida que se utiliza para separar compuestos de bajo peso molecular. Entonces, esta es la diferencia clave entre FPLC y HPLC. Además, FPLC utiliza monitores de pH y conductividad, así como colectores de fracciones. Por el contrario, HPLC no utiliza monitores de pH y conductividad ni colectores de fracciones.
La siguiente infografía enumera más diferencias entre FPLC y HPLC en forma tabular.
Resumen: FPLC frente a HPLC
La cromatografía es una técnica analítica de laboratorio utilizada para la separación de componentes de una mezcla. Se divide en varios tipos, como cromatografía en columna, cromatografía de gases, cromatografía líquida, cromatografía de intercambio iónico, etc. FPLC y HPLC son dos tipos de técnicas de cromatografía líquida. FPLC es un tipo de cromatografía líquida que se utiliza para purificar biomoléculas grandes como proteínas, nucleótidos y péptidos. Por otro lado, HPLC es un tipo de cromatografía líquida que se utiliza para separar compuestos de bajo peso molecular. Por lo tanto, este es el resumen de cuál es la diferencia entre FPLC y HPLC.
