La diferencia clave entre RP HPLC y HIC es que RP HPLC utiliza una fase móvil más polar y una fase estacionaria menos polar. Mientras que HIC utiliza una fase estacionaria hidrofóbica que permite que las moléculas hidrofóbicas se adhieran a ella.
La cromatografía es una técnica analítica que ayuda a separar una mezcla en sus componentes. Primero, tenemos que disolver la muestra para separarla en una solución. Esta mezcla solución-sustancia se denomina fase móvil. Luego, la fase móvil pasa a través de otro material llamado fase estacionaria. La fase estacionaria determina la separación de los componentes. La separación ocurre debido a la partición del material entre la fase móvil y la fase estacionaria.
¿Qué es HPLC RP?
El término RP HPLC significa cromatografía líquida de alto rendimiento en fase inversa. Implica la separación de los componentes de una mezcla, según su hidrofobicidad. Los componentes hidrofóbicos en la fase móvil se unen con los ligandos hidrofóbicos inmovilizados en la fase estacionaria, mientras que los componentes hidrofílicos eluyen a través de la fase estacionaria sin adherirse a la superficie de la fase estacionaria.
Figura 01: Aparato de HPLC
Además, este método tiene más reproducibilidad en comparación con otras técnicas cromatográficas y también muestra una amplia aplicabilidad. Por lo tanto, usamos este método en laboratorios para más del 75 % de todos los métodos de HPLC. La mayoría de las veces, usamos una mezcla acuosa de agua con un solvente orgánico polar miscible como fase móvil. Por lo tanto, asegurará la unión de los componentes hidrofóbicos en la solución a la superficie de la fase estacionaria.
¿Qué es HIC?
El término HIC significa cromatografía de interacción hidrofóbica. Es un tipo de HPLC de fase inversa, y este método se utiliza principalmente para la separación de biomoléculas grandes como las proteínas. En este método, necesitamos usar un medio acuoso para hacer la muestra de la biomolécula. Es porque los solventes orgánicos pueden causar la desnaturalización de las proteínas. Además, esta técnica utiliza la interacción entre moléculas grandes con una superficie ligeramente hidrofóbica de la fase estacionaria. Además, tenemos que usar una alta concentración de sal en la muestra porque favorece que la proteína quede retenida en el empaque; este proceso se llama salado. Al disminuir gradualmente la concentración de sal, podemos hacer que las biomoléculas eluyan por separado según su hidrofobicidad.
Por lo general, este método utiliza las condiciones opuestas a las de la cromatografía de intercambio iónico. En esta técnica, primero, necesitamos pasar una solución tampón a través de la columna para reducir la solvatación del soluto en la muestra. Hace que las regiones hidrofóbicas de la proteína queden expuestas. Sin embargo, cuando la molécula es más hidrofóbica, se requiere menos sal para promover la unión. Aquí, los solutos menos hidrófobos se eluyen primero y, según el cambio en la concentración de sal, los solutos más hidrófobos se eluyen en último lugar.
¿Cuál es la diferencia entre RP HPLC y HIC?
La cromatografía es una técnica analítica para la separación de componentes en una mezcla. RP HPLC y HIC son dos técnicas cromatográficas especializadas. La diferencia clave entre RP HPLC y HIC es que RP HPLC usa una fase móvil más polar y una fase estacionaria menos polar, mientras que HIC usa una fase estacionaria hidrofóbica, que permite que las moléculas hidrofóbicas se adhieran a ella.
La siguiente infografía resume la diferencia entre RP HPLC y HIC.
Resumen: RP HPLC frente a HIC
La cromatografía es una técnica analítica para la separación de componentes en una mezcla. RP HPLC y HIC son dos técnicas cromatográficas especializadas. La diferencia clave entre RP HPLC y HIC es que RP HPLC usa una fase móvil más polar y una fase estacionaria menos polar, mientras que HIC usa una fase estacionaria hidrófoba, que permite que las moléculas hidrófobas se adhieran a ella.
