La diferencia clave entre la HPLC de fase inversa y la fase normal es que la HPLC de fase inversa utiliza una fase estacionaria no polar y una fase móvil polar, mientras que la HPLC de fase normal utiliza una fase estacionaria polar y una fase móvil menos polar.
La HPLC en fase normal es la técnica más antigua de HPLC que Tswett utilizaba en sus separaciones de extractos de plantas; usó tiza en una columna de vidrio. Este fue el modo clásico de cromatografía que llevó a nombrarlo como la técnica "normal". La HPLC de fase inversa, por otro lado, es lo opuesto a la técnica normal, que los científicos desarrollaron recientemente.
¿Qué es la HPLC de fase inversa?
La HPLC de fase inversa es una técnica cromatográfica en la que utilizamos una fase estacionaria hidrofóbica. Entre todos los métodos de HPLC, utilizamos este método en aproximadamente el 70 % debido a su amplia aplicabilidad y reproducibilidad. La fase estacionaria es no polar y la fase móvil es polar.
La mayoría de las veces, los científicos utilizan una mezcla acuosa de agua con un disolvente orgánico polar miscible, como acetonitrilo o metanol, como fase móvil. Por lo tanto, los analitos interactúan con la fase estacionaria no polar.
¿Qué es la HPLC en fase normal?
La HPLC en fase normal es una técnica cromatográfica en la que utilizamos una fase estacionaria hidrófila. Es el método tradicional de HPLC, aunque no lo usamos mucho. La fase estacionaria es polar y la fase móvil es no polar. Más importante aún, la fase móvil de esta técnica es 100% orgánica. Significa que no se usa agua para esto.
Figura 01: Un perfil de muestra para cromatogramas de HPLC de fase normal y fase inversa según la polaridad de los componentes en el analito.
Típicamente, la fase estacionaria contiene sílice, ciano, diol, fases unidas a amino, etc. Las fases móviles incluyen solventes orgánicos como hexano, acetato de etilo, etc. Esta técnica se basa en la retención de moléculas de analitos o solventes en la fase estacionaria polar.
¿Cuál es la diferencia entre HPLC de fase inversa y fase normal?
La HPLC de fase inversa es una técnica cromatográfica en la que utilizamos una fase estacionaria hidrofóbica. La fase estacionaria de esta técnica es no polar mientras que la fase móvil es polar. Además, los científicos utilizan una mezcla acuosa de agua con un disolvente orgánico polar miscible, como acetonitrilo o metanol, como fase móvil en la HPLC de fase inversa. Por el contrario, la HPLC en fase normal es una técnica cromatográfica en la que utilizamos una fase estacionaria hidrófila. La fase estacionaria de esta técnica es polar mientras que la fase móvil es no polar. Además, los científicos utilizan disolventes orgánicos como hexano, acetato de etilo, etc. como fase móvil de la HPLC de fase normal. La siguiente infografía presenta la diferencia entre la HPLC de fase inversa y de fase normal en forma tabular.
Resumen: HPLC de fase inversa frente a fase normal
Las técnicas HPLC de fase inversa y fase normal son dos técnicas de cromatografía líquida. La diferencia clave entre la HPLC de fase inversa y la fase normal es que la HPLC de fase inversa usa una fase estacionaria no polar y una fase móvil polar, mientras que la HPLC de fase normal usa una fase estacionaria polar y una fase móvil menos polar.
