La diferencia clave entre las sondas radiactivas y no radiactivas es que las sondas radiactivas son secuencias de ADN o ARN monocatenario que están marcadas con isótopos radiactivos, mientras que las sondas no radiactivas son secuencias de ADN o ARN monocatenario que están marcadas con una etiqueta química o una etiqueta fluorescente.
La hibridación de ácidos nucleicos es una técnica importante en biología molecular, especialmente en el diagnóstico microbiano. Ayuda a identificar o detectar una secuencia de ácido nucleico particular. En esta técnica, los ácidos nucleicos se fijan a una superficie sólida y se hibridan con una sonda. Una sonda es un fragmento de ADN o ARN que es complementario a una secuencia de interés. Si la secuencia diana está presente en la muestra, la sonda se hibridará con ella y la hará detectable. Hay dos tipos de sondas como sondas radiactivas y no radiactivas. Por lo tanto, podemos etiquetar las sondas con una etiqueta radiactiva o una etiqueta fluorescente.
¿Qué son las sondas radiactivas?
Las sondas radiactivas son fragmentos de ADN o ARN monocatenarios con una etiqueta radiactiva. Los radioisótopos se utilizan en la preparación de sondas radiactivas. Los radioisótopos 32P, 33P y 35S se utilizan comúnmente en el etiquetado de sondas. Además, los radioisótopos 3H y 1251 también se utilizan en menor medida en el marcaje de sondas. Pero se utilizan para aplicaciones específicas. Entre los diferentes radioisótopos, 32P es el isótopo más utilizado para marcar sondas radiactivas.
Las sondas radiactivas proporcionan un mayor grado de fiabilidad y especificidad. Por lo tanto, proporcionan la máxima sensibilidad y permiten una cuantificación precisa de las secuencias diana. Sin embargo, existen varias desventajas asociadas con las sondas radiactivas. Tienen vidas medias cortas. Además, son peligrosos y la producción, el uso y la eliminación son problemáticos cuando se manipulan. Además, la preparación de la sonda radiactiva es un proceso costoso. Por lo tanto, debido a problemas de seguridad y costo, las sondas radiactivas no se utilizan hoy en día como sondas no radiactivas.
¿Qué son las sondas no radiactivas?
Las sondas no radiactivas son el segundo tipo de sondas que están marcadas químicamente. La digoxigenina es una sonda no radiactiva, que es un marcador basado en anticuerpos. Las sondas de digoxigenina son específicas y sensibles. La biotina es otro marcador utilizado en la preparación de sondas no radiactivas. Los sistemas de detección de biotina/estreptavidina y digoxigenina/anticuerpo son las sondas no radiactivas más utilizadas en la hibridación. Además, el sistema de peroxidasa de rábano picante es otro sistema de sonda no radiactiva. Una vez que estas sondas no radiactivas se hibridan con las secuencias diana, pueden detectarse mediante autorradiografía u otras técnicas de formación de imágenes.
Figura 01: Hibridación con sondas no radiactivas
Las sondas no radiactivas se utilizan con más frecuencia en la hibridación de ácidos nucleicos que las sondas radiactivas. Esto se debe a que las sondas no radiactivas no están asociadas con materiales peligrosos. Además, los métodos de detección no radiactivos requieren tiempos de exposición más cortos para detectar la señal de hibridación. Sin embargo, los pasos involucrados en la hibridación del ADN con sondas no radiactivas suelen ser tediosos y lentos. Además, las soluciones disponibles comercialmente son caras.
¿Cuáles son las similitudes entre las sondas radiactivas y no radiactivas?
- Las sondas radiactivas y no radiactivas son dos tipos de sondas utilizadas en la hibridación de ácidos nucleicos.
- Facilitan la detección de secuencias diana en la muestra.
- Ambos tipos de sondas son igualmente sensibles y específicas.
¿Cuál es la diferencia entre las sondas radiactivas y no radiactivas?
Las sondas radiactivas son secuencias de ADN o ARN monocatenario marcadas con isótopos radiactivos, mientras que las sondas no radiactivas son secuencias de ADN o ARN monocatenario marcadas con una etiqueta química. Entonces, esta es la diferencia clave entre las sondas radiactivas y no radiactivas. Además, los isótopos radiactivos son peligrosos. Por lo tanto, las sondas radiactivas son considerablemente peligrosas, mientras que las sondas no radiactivas no son peligrosas.
Además, otra diferencia entre las sondas radiactivas y no radiactivas son sus desventajas. Las vidas medias cortas y los peligros asociados con su producción, uso y eliminación son las desventajas del uso de sondas radiactivas. Por otro lado, los pasos involucrados en la hibridación de ADN con sondas no radiactivas suelen ser tediosos y lentos.
La siguiente infografía muestra más comparaciones relacionadas con la diferencia entre sondas radiactivas y no radiactivas.
Resumen: sondas radiactivas y no radiactivas
Una sonda es un fragmento de ADN o ARN que contiene una secuencia de nucleótidos que es complementaria a la secuencia de interés. Para detectar la secuencia diana, las sondas se pueden marcar de forma radiactiva, fluorescente o química. Las sondas se unen con secuencias complementarias en la muestra. Las sondas radiactivas se marcan con isótopos radiactivos, mientras que las no radiactivas se marcan con biotina, digoxigenina o peroxidasa de rábano picante. Por lo tanto, esta es la diferencia clave entre las sondas radiactivas y no radiactivas.
