Diferencia clave: ELISA directo frente a indirecto
Un inmunoensayo ligado a enzimas (ELISA), también conocido como inmunoensayo enzimático, es una prueba serológica que detecta anticuerpos en la sangre. Se utiliza como herramienta de diagnóstico para saber si el paciente ha estado expuesto a un determinado tipo de virus u otro agente infeccioso (antígeno) y si el organismo ha producido anticuerpos contra la infección. ELISA también puede identificar infecciones pasadas y actuales. Por lo tanto, ELISA se utiliza a menudo como una prueba de preselección por parte de los médicos antes del análisis en profundidad de las enfermedades. Esta prueba se puede realizar en el laboratorio tomando una muestra de sangre del paciente. Hay dos tipos de prueba ELISA: ELISA directa y ELISA indirecta. La diferencia clave entre ELISA directo e indirecto es que ELISA indirecto es más sensible y requiere la adición de un anticuerpo secundario, mientras que ELISA directo es menos sensible y solo usa un anticuerpo primario.
¿Qué es ELISA directo?
ELISA es una prueba de diagnóstico de enfermedades que se realiza para identificar la presencia de antígenos o anticuerpos particulares en la sangre. Se realiza como un ensayo en placa. Utiliza anticuerpos ligados a enzimas fácilmente analizables. La presencia de antígenos en la muestra de suero se une a anticuerpos específicos vinculados con enzimas. En el paso final, se agrega un sustrato específico para que reaccione con la enzima. La enzima convierte el sustrato en un producto coloreado o productor de señales. El cambio de color en el sustrato químico revela la presencia de un anticuerpo particular en la muestra de suero. La prueba ELISA directa utiliza solo un anticuerpo primario vinculado a la enzima. Al unirse al antígeno, cambia rápidamente de color, lo que indica la presencia del agente infeccioso en la sangre. Sin embargo, la intensidad de las señales es más débil en ELISA directo ya que los epítopos se limitan a la unión de los antígenos. Por lo tanto, ELISA directo es menos sensible en comparación con ELISA indirecto.
Figura 01: Prueba ELISA directa
¿Qué es ELISA indirecto?
ELISA se puede realizar utilizando dos tipos de anticuerpos, a saber; anticuerpo primario y anticuerpo secundario. La herramienta ELISA indirecta utiliza ambos tipos de anticuerpos para amplificar las señales y lograr una mejor detección. La técnica ELISA indirecta se realiza de la siguiente manera.
- Las placas se incuban con antígenos y se lavan para bloquear la unión no específica.
- Luego se agregan y se lavan los anticuerpos primarios.
- Se añaden anticuerpos secundarios ligados a enzimas y se lavan.
- Se añade un sustrato y se deja reaccionar con las enzimas.
- Se detectan señales y se identifica la presencia o ausencia del antígeno específico en la muestra.
En la prueba ELISA indirecta, varios anticuerpos secundarios pueden unirse a un único anticuerpo primario. Los anticuerpos secundarios están vinculados con enzimas fácilmente analizables. Por lo tanto, un enlace puede generar una señal fuerte debido a más de una interacción. Por lo tanto, ELISA indirecto es más sensible que ELISA directo. Sin embargo, ELISA indirecto puede producir señales inespecíficas debido a reacciones cruzadas de los anticuerpos secundarios.
Figura 02: Prueba ELISA indirecta
¿Cuál es la diferencia entre ELISA directo e indirecto?
ELISA directo frente a indirecto |
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| El ELISA directo es menos sensible que el ELISA indirecto. | El ELISA indirecto es más sensible. |
| Tiempo empleado | |
| La prueba ELISA directa es un proceso rápido. | El ELISA indirecto requiere mucho tiempo. |
| Uso de anticuerpos | |
| Solo se usa un tipo de anticuerpos (anticuerpos primarios) en ELISA directo. | Los anticuerpos primarios y secundarios se utilizan para ELISA indirecto. |
| Enlace con enzimas | |
| Los anticuerpos primarios están vinculados con las enzimas. | Los anticuerpos secundarios están vinculados con las enzimas. |
| Reactividad cruzada de segundos anticuerpos | |
| El ELISA directo elimina la reactividad cruzada de segundos anticuerpos. | El ELISA indirecto se ve afectado por la reactividad cruzada de segundos anticuerpos. |
| Señales | |
| Las señales son débiles en comparación con ELISA indirecto. | Las señales se amplifican en ELISA indirecto. Por lo tanto, es fácil de detectar. |
Resumen: ELISA directo frente a indirecto
ELISA es una técnica bioquímica utilizada principalmente en inmunología para detectar la presencia de un anticuerpo o un antígeno en una muestra de sangre de un paciente. Se puede realizar a través de dos procesos conocidos como ELISA directo o indirecto. La prueba ELISA directa usa solo anticuerpos primarios para detectar el antígeno, mientras que ELISA indirecto usa anticuerpos primarios y secundarios. En ELISA directo, se marcan los anticuerpos primarios, mientras que en ELISA indirecto se marcan los anticuerpos secundarios. Esta es la diferencia entre ELISA directo e indirecto.
