Diferencia clave: página SDS frente a Western Blot
Western blotting es una técnica que detecta una proteína específica de una muestra de proteína. Esta técnica se realiza a través de varios pasos clave: electroforesis en gel, transferencia e hibridación. La electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (Página SDS) es un tipo de técnica de electroforesis en gel que se utiliza para separar las proteínas según sus tamaños (pesos moleculares). Western blot es una hoja especial de una membrana de transferencia que se utiliza para transferir el mismo patrón de las proteínas en la página SDS. La diferencia clave entre SDS Page y western blot es que SDS Page permite la separación de proteínas en una mezcla, mientras que western blot permite la detección y cuantificación de una proteína específica de una mezcla. Ambos son útiles en los estudios de análisis de proteínas.
¿Qué es la página SDS?
SDS Page es una técnica de electroforesis en gel utilizada para la separación de proteínas. Se usa comúnmente en bioquímica, genética, medicina forense y biología molecular. Una vez extraídas las proteínas de la muestra, se pasan por un gel compuesto por SDS y poliacrilamida. SDS es un detergente aniónico que se utiliza para linealizar proteínas (proteínas desnaturalizadas) y para impartir una carga negativa a las proteínas linealizadas proporcional a su masa molecular. La poliacrilamida se convierte en el soporte sólido del gel. Las proteínas desnaturalizadas que están cargadas negativamente migran hacia el extremo positivo del aparato a través del gel. De acuerdo con el tamaño de las proteínas, las velocidades de migración difieren entre las proteínas y se produce la separación. Por lo tanto, la página SDS es útil para la separación de proteínas individuales en función de sus tamaños.
La preparación del gel de poliacrilamida para el fraccionamiento de proteínas es un paso crucial en la página SDS. La concentración correcta de poliacrilamida y el tipo de agente reticulante utilizado afectan fuertemente las propiedades físicas del gel, lo que dificulta la separación real de las diferentes proteínas. El tamaño de los poros del gel debe manejarse adecuadamente para una separación efectiva. Sin embargo, SDS Page se considera una técnica de separación de proteínas de alta resolución.
La técnica de SDS Page tiene una gran limitación en el análisis de proteínas. Dado que SDS desnaturaliza las proteínas antes de la separación, no permite la detección de actividad enzimática, interacciones de unión a proteínas, cofactores de proteínas, etc.
Figura 01: Página SDS
¿Qué es Western Blot?
La técnica de transferencia Western permite la detección de una proteína específica de una mezcla de proteínas y la medición de la cantidad y el peso molecular de la proteína. Western blot es la membrana utilizada durante el procedimiento de transferencia para obtener la imagen especular de los patrones de proteínas en el gel de poliacrilamida SDS. La membrana que se utiliza para la transferencia Western se compone principalmente de nitrocelulosa o difluoruro de polivinilideno (PVDF). La membrana con la proteína transferida se puede utilizar para identificar la proteína deseada. Requiere anticuerpos de alta calidad para la detección de la proteína deseada por hibridación. El anticuerpo se une a su antígeno específico y revela la presencia del antígeno deseado, que es una proteína.
La transferencia de las proteínas del gel de poliacrilamida SDS al western blot se realiza mediante electrotransferencia. Es un método eficaz y rápido que hace que las proteínas se extraigan por electroforesis del gel y pasen a la membrana de nitrocelulosa (Western blot).
Figura 02: Western Blot
¿Cuál es la diferencia entre SDS Page y Western Blot?
Página SDS frente a Western Blot |
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| SDS Page es una técnica de electroforesis en gel. | Western blot es una técnica que se realiza en una membrana para detectar una proteína específica de una mezcla. |
| Usar | |
| La página SDS permite separar las proteínas según su tamaño. | Western blot permite la transferencia de proteínas en el gel de la página SDS sin cambiar su patrón y permite la hibridación con anticuerpos específicos. |
| Desventajas | |
| La desnaturalización de proteínas, el alto costo y la presencia de neurotoxinas químicas son las desventajas de esta técnica. | Esta técnica lleva mucho tiempo y requiere una buena experiencia personal y condiciones específicas controladas. |
Resumen: página SDS frente a Western Blot
La página SDS y el western blot son dos métodos involucrados en el análisis de proteínas. SDS Page permite una fácil separación de proteínas en un gel según su peso molecular. Western blot ayuda a confirmar la presencia y cantidad de una proteína específica a través de la hibridación con anticuerpos específicos. Esta es la diferencia entre SDS Page y western blot.
