Diferencia clave: página SDS y página nativa
SDS y página nativa son dos tipos de técnicas de electroforesis en gel de poliacrilamida utilizadas en biología molecular. La diferencia clave entre SDS Page y Native Page es el tipo de gel de poliacrilamida utilizado. En SDS Page se utiliza un gel desnaturalizante, por lo tanto, las moléculas se separan en función de su peso molecular. En cambio, en Native Page se utilizan geles no desnaturalizantes. Por lo tanto, las moléculas se separan en función de su tamaño, carga y forma.
Electroforesis en gel de poliacrilamida (Page) utiliza un gel hecho mediante la polimerización de monómeros de acrilamida con metileno bisacrilamida. La poliacrilamida es más resistente y estable al calor que la agarosa. Los geles de poliacrilamida tienen un tamaño de poro más pequeño que permite la separación eficiente de proteínas. Hay dos tipos principales de configuraciones de página, a saber, página SDS y página nativa. SDS Page o electroforesis en gel de poliacrilamida con sulfato de dodecil sodio separa las proteínas en función de sus pesos moleculares. Los geles desnaturalizantes se utilizan en la página SDS. Native Page utiliza geles no desnaturalizantes y separa las proteínas en función de su tamaño, carga y forma (conformación 3D).
¿Qué es la página SDS?
SDS Page es la técnica electroforética más común utilizada para separar proteínas en función de su peso molecular. El gel se hace añadiendo SDS (dodecilsulfato de sodio), que es un detergente. SDS dentaduras de proteínas en monómeros. SDS es un detergente aniónico. Por lo tanto, agrega una carga neta negativa a las proteínas dentro de un amplio rango de pH. Cuando la carga negativa neta se imparte a las moléculas de proteína, debido a la variación de carga, las estructuras complejas se descomponen. Debido a la carga negativa, las proteínas se atraen hacia el extremo positivo. Por lo tanto, las moléculas con menor peso molecular viajan más rápido en la matriz del gel y se pueden observar cerca del ánodo, mientras que las proteínas de mayor peso molecular se observan más cerca de los pocillos.
Figura 01: Página SDS
La unión del SDS a la cadena polipeptídica es proporcional a su masa molecular relativa. Por lo tanto, la masa molecular también se puede determinar a través de la página SDS. La tinción de los geles SDS Page se realiza mediante tinción con azul de bromofenol. Las aplicaciones del rango de páginas de SDS en mayor medida donde se puede usar para estimar la masa molecular relativa y determinar la abundancia relativa de proteínas en una mezcla de proteínas. SDS Page también se puede utilizar para determinar la distribución de proteínas en una mezcla de proteínas. SDS Page también se aplica para purificar y evaluar proteínas. Se utiliza como un procedimiento preliminar para la transferencia Western y la hibridación, que a su vez se utiliza para el mapeo y la identificación de proteínas.
¿Qué es la página nativa?
Native La electroforesis en gel de poliacrilamida (Native Page) utiliza un gel no desnaturalizante. Por lo tanto, SDS o cualquier otro agente desnaturalizante no se agrega a la matriz de gel. En Native Page, la separación de proteínas se basa en la carga y el tamaño de la proteína. Por lo tanto, la movilidad de la proteína depende de la carga y el tamaño de la proteína.
La carga de la proteína depende de las cadenas laterales de los aminoácidos. Si las cadenas laterales tienen carga negativa, la proteína recibirá una carga negativa general y viceversa. Las proteínas conservan una conformación 3D debido al plegamiento que tiene lugar. El plegamiento es el resultado de varios tipos de enlaces en proteínas, como enlaces disulfuro, interacciones hidrofóbicas y enlaces de hidrógeno. Por lo tanto, si la página nativa se lleva a un pH neutro, las proteínas se separarán según la forma molecular de la proteína. Por lo tanto, Native Page se puede utilizar como una técnica sensible para detectar el cambio en la carga o la conformación de la proteína.
La principal ventaja de la página nativa es que la proteína utilizada para el análisis de página se puede recuperar en su estado original después del análisis de página, ya que la proteína no se altera durante el proceso. Native Page es una técnica de rendimiento relativamente alto y la estabilidad de la proteína aumenta.
Figura 02: Página nativa
Una vez finalizada la ejecución del gel, el gel de Native Page se puede ver mediante tinción con azul de bromofenol o cualquier otro reactivo de tinción adecuado. Las aplicaciones de Native Page incluyen la separación de proteínas ácidas, incluidas glicoproteínas como la eritropoyetina recombinante humana o la identificación de proteínas presentes en la albúmina de suero bovino (BSA).
¿Cuáles son las similitudes entre la página SDS y la página nativa?
- Tanto los sistemas SDS Page como Native Page utilizan gel de poliacrilamida como matriz del gel.
- Ambos se utilizan para la separación e identificación de proteínas.
- Ambos usan movilidad electroforética para separar los compuestos.
- Ambos se pueden hacer de manera vertical u horizontal (principalmente como configuraciones de página verticales porque la tirada es mayor).
- El aparato de electroforesis, incluido el tanque de gel, los peines y la fuente de alimentación, son necesarios para el funcionamiento de ambas técnicas.
- La visualización del gel se puede realizar mediante métodos de tinción en ambas técnicas.
¿Cuál es la diferencia entre la página SDS y la página nativa?
Página SDS frente a página nativa |
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| SDS Page o Sodio-dodecilsulfato Page separa las proteínas en función de su peso molecular y utiliza un gel desnaturalizante. | Native Page utiliza geles no desnaturalizantes y separa las proteínas según su tamaño, carga y forma (conformación 3D). |
| Tipo de gel | |
| En la página SDS se utiliza un gel desnaturalizante. | En la página nativa se utiliza un gel no desnaturalizante. |
| Presencia de SDS | |
| SDS está presente como detergente para impartir una carga negativa en la muestra en la página SDS. | SDS no está presente en la página nativa. |
| Base de separación | |
| La separación de proteínas depende del peso molecular de la proteína en la página SDS. | La separación depende del tamaño y la forma de la molécula de proteína en la página nativa. |
| Estabilidad de la proteína | |
| La estabilidad de la proteína es baja en la página SDS. | La estabilidad de la proteína es alta en la página nativa. |
| Recuperación de la proteína original | |
| No es posible ya que está desnaturalizado en la página SDS. | Posible en la página nativa. |
Resumen: página SDS frente a página nativa
SDS Page y Native Page son dos tipos de técnicas de electroforesis en gel de poliacrilamida que se utilizan para separar proteínas. SDS Page se trata con un detergente llamado SDS. SDS imparte una carga negativa general a la proteína, que luego da como resultado la desnaturalización de la proteína. Por lo tanto, las proteínas se separan en función de su peso molecular. Por el contrario, la técnica Native Page no utiliza ningún agente desnaturalizante. Por lo tanto, las proteínas se separan según su tamaño o su forma. Esta es la diferencia entre la página SDS y la página nativa.
