Diferencia clave: caminar vs s altar cromosómicos
La caminata cromosómica y el s alto cromosómico son dos herramientas técnicas utilizadas en biología molecular para localizar genes en los cromosomas y mapear físicamente los genomas. La caminata cromosómica es una técnica utilizada para clonar un gen objetivo en una biblioteca genómica mediante el aislamiento repetido y la clonación de clones adyacentes de la biblioteca genómica. El s alto cromosómico es una versión especial de la marcha cromosómica que supera los puntos de ruptura de la marcha cromosómica. La caminata cromosómica solo puede secuenciar y mapear pequeñas longitudes de cromosomas, mientras que el s alto cromosómico permite la secuenciación de grandes partes de los cromosomas. Esta es la diferencia clave entre la marcha cromosómica y el s alto cromosómico.
¿Qué es el paseo cromosómico?
La caminata cromosómica es una herramienta que explora las regiones de secuencia desconocida de los cromosomas mediante el uso de fragmentos de restricción superpuestos. En la caminata cromosómica, una parte de un gen conocido se usa como sonda y se continúa con la caracterización de la longitud total del cromosoma que se mapeará o secuenciará. Esto va desde el marcador hasta la longitud objetivo. En la caminata cromosómica, los extremos de cada fragmento superpuesto se utilizan para la hibridación para identificar la siguiente secuencia.
Las sondas se preparan a partir de las piezas finales del ADN clonado y se subclonan. Luego se utilizan para encontrar el siguiente fragmento superpuesto. Todas estas secuencias superpuestas se utilizan para construir el mapa genético del cromosoma y localizar los genes diana. Es un método para analizar tramos largos de ADN mediante pequeños fragmentos superpuestos de la biblioteca genómica reconstruida.
Técnica de caminata cromosómica: pasos
- Aislamiento de un fragmento de ADN que contiene el gen o marcador conocido cerca del gen objetivo
- Preparación del mapa de restricción del fragmento seleccionado y subclonación de la región final del fragmento para utilizar como sonda
- Hibridación de la sonda con el siguiente fragmento superpuesto
- Preparación del mapa de restricción del fragmento 1 y subclonación de la región final del fragmento 1 para usar como sonda para la identificación del siguiente fragmento superpuesto.
- Hibridación de la sonda con el siguiente fragmento superpuesto 2
- Preparación del mapa de restricción del fragmento 2 y subclonación de la región final del fragmento 2 para que sirva como sonda para la identificación del siguiente fragmento superpuesto
Los pasos anteriores deben continuarse hasta el gen objetivo o hasta el final de 3' de la longitud total de la secuencia.
Figura 01: Técnica de caminata cromosómica
La caminata cromosómica es un aspecto importante de la citogenética para encontrar SNP de muchos organismos y analizar las enfermedades de transmisión genética y encontrar mutaciones de genes relevantes.
¿Qué es el s alto cromosómico?
El s alto cromosómico es una técnica utilizada en biología molecular para el mapeo físico de los genomas de los organismos. Esta técnica se introdujo para superar una barrera de la marcha cromosómica que surgía al encontrar las regiones de ADN repetitivas durante el proceso de clonación. Por lo tanto, la técnica de s alto cromosómico puede considerarse como una versión especial de la marcha cromosómica. Es un método rápido en comparación con la caminata cromosómica y permite eludir las secuencias de ADN repetitivas que no son propensas a clonarse durante la caminata cromosómica. El s alto cromosómico reduce la brecha entre el gen objetivo y los marcadores conocidos disponibles para el mapeo del genoma.
La herramienta de s alto de cromosomas comienza con el corte de un ADN específico con endonucleasas de restricción especiales y la ligadura de los fragmentos en bucles circulares. Luego, se utiliza un cebador diseñado a partir de una secuencia conocida para secuenciar los bucles circularizados. Este manual permite s altar y secuenciar de forma alternativa. Por lo tanto, puede pasar por alto las secuencias de ADN repetitivas y recorrer rápidamente el cromosoma para buscar el gen objetivo.
El descubrimiento del gen que codifica para la enfermedad de la fibrosis quística se realizó utilizando la herramienta de s alto cromosómico. Combinados, los s altos cromosómicos y la caminata pueden mejorar el proceso de mapeo del genoma.
Figura 02: S alto de cromosomas
¿Cuál es la diferencia entre caminar y s altar cromosómicos?
Caminata cromosómica frente a s alto |
|
| El cromosoma es una herramienta utilizada en biología molecular para el mapeo del genoma y la localización de genes específicos. | El s alto de cromosomas es una herramienta utilizada para el mapeo físico de genomas y la búsqueda rápida de genes diana en los cromosomas. |
| Longitudes comparativas de secuenciación | |
| Solo se pueden clonar fragmentos pequeños mediante la caminata cromosómica. | Las longitudes más grandes de los cromosomas se pueden mapear mediante el s alto cromosómico. |
| Clonación repetitiva de ADN en cromosomas | |
| La técnica de caminar por los cromosomas tiene dificultad para caminar a través de las secuencias repetidas de ADN que se encuentran en los cromosomas. | Permite pasar por alto las secuencias de ADN repetitivas. Por lo tanto no hay dificultad para encontrarlos durante la secuenciación. |
| Factores que afectan los procesos | |
| El éxito del proceso depende del tamaño del genoma y de la distancia que se debe "recorrer" desde una posición genómica conocida hasta el gen deseado. | El éxito no depende del tamaño del genoma de la distancia del marcador al objetivo. |
| Efectos del ADN no clonado | |
| La marcha cromosómica se puede detener con fragmentos de ADN no clonados. | La nota más baja que pueden tocar los flautines es D4. |
| Necesita una secuencia conocida | |
| El proceso comienza con un gen conocido cerca del objetivo. | El proceso requiere un fragmento conocido para el diseño del cebador. |
Resumen - Cromosoma Caminar vs S altar
La caminata cromosómica se aplica con frecuencia cuando se sabe que un gen en particular está ubicado cerca de un gen previamente clonado en un cromosoma y es posible identificarlo con el aislamiento repetido de clones genómicos adyacentes de la biblioteca genómica. Sin embargo, cuando se encuentran regiones de ADN repetitivas durante la técnica de caminata cromosómica, el proceso no puede continuar. Por lo tanto, la técnica se rompe a partir de ese punto. El s alto cromosómico es una herramienta de biología molecular que supera esta limitación para mapear genomas. Pasa por alto estas regiones de ADN repetitivas que son difíciles de clonar y ayuda en el mapeo físico de los genomas. Esta es la principal diferencia entre caminar y s altar cromosómicos.
