La diferencia clave entre el fragmento Klenow y la ADN polimerasa 1 es que el fragmento Klenow es una gran parte de la ADN polimerasa 1 que carece de actividad exonucleasa de 5′ a 3′, mientras que la ADN polimerasa es una enzima de E. coli que tiene las tres dominios que incluyen actividad exonucleasa 5′ a 3′.
La ADN polimerasa es una de las enzimas clave involucradas en la replicación del ADN en los organismos vivos. Hay diferentes formas de la enzima ADN polimerasa que se encuentran en eucariotas y procariotas según el tamaño y la forma. Las ADN polimerasas 1, 2 y 3 se encuentran solo en organismos procarióticos y desempeñan diferentes funciones en la replicación del ADN. La ADN polimerasa 1 tiene tres dominios con 5' a 3' polimerasa, 3' a 5' actividad de exonucleasa y 5' a 3' actividad de exonucleasa. El fragmento Klenow es un producto proteolítico de la ADN polimerasa 1. Posee actividades de polimerasa de 5 a 3′ y de exonucleasa de 3′ a 5′ de la ADN polimerasa 1 intacta, pero carece de la actividad de exonucleasa de 5′ a 3′.
¿Qué es el fragmento de Klenow?
El fragmento Klenow es una gran parte de la ADN polimerasa 1. A diferencia de la ADN polimerasa 1, la actividad de exonucleasa de 5′ a 3′ no se observa en el fragmento de Klenow ya que carece del dominio de exonucleasa directo de 5′ a 3′. Los fragmentos de Klenow se producen al digerir la ADN polimerasa 1 con una proteasa llamada subtilisina, que es una enzima que digiere proteínas. En algunas aplicaciones, la actividad exonucleasa 3' a 5' del fragmento Klenow se vuelve indeseable. Puede eliminarse introduciendo una mutación en el gen que codifica el fragmento Klenow. La enzima resultante que tiene solo la actividad polimerasa 5' a 3' se conoce como fragmento exo-Klenow. Morfológicamente, el fragmento de Klenow se asemeja a la mano derecha humana. Tiene un dominio de exonucleasa 3′-5′ N-terminal y un dominio de polimerasa C-terminal separados por aproximadamente 30 A.
Figura 01: Fragmento de Klenow y ADN polimerasa 1
El fragmento Klenow es una herramienta importante en las técnicas de biología molecular. Los fragmentos de Klenow tienen múltiples usos. Son extremadamente importantes en la clonación de extremos romos para producir fragmentos romos. Los fragmentos de Klenow pueden eliminar voladizos de 3′ o rellenar voladizos de 5′ para formar extremos romos. Además, los fragmentos de Klenow se utilizan para sintetizar ADN bicatenario a partir de cadenas sencillas. Además, se utilizan para preparar sondas marcadas radiactivamente utilizando la actividad de polimerasa de ADN dependiente de ADN de 5' a 3'.
¿Qué es la ADN polimerasa 1?
La ADN polimerasa 1 (Pol 1) es una enzima que se encuentra en los procariotas y es necesaria para la replicación del ADN bacteriano. Es el primer tipo de ADN polimerasa descubierto por Arthur Kornberg en 1956. Pol 1 es la polimerasa más abundante en E. coli. Está codificado por el gen polA y está compuesto por 928 aminoácidos. Consta de tres dominios. Los tres dominios cumplen funciones distintas. Dos dominios llevan a cabo actividad exonucleasa 5' a 3' y actividad exonucleasa 3' a 5'. Debido a esta actividad que posee Pol 1, es más popular como enzima reparadora del ADN que como enzima replicante del ADN. El tercer dominio tiene la capacidad de catalizar múltiples polimerizaciones (5′ a 3′) antes de liberar el ADN molde y conectar los fragmentos de Okazaki al llenar el nuevo ADN y eliminar los cebadores de ARN.
Figura 02: ADN polimerasa
Pol 1 aislado de E Coli se usó ampliamente en aplicaciones moleculares. Sin embargo, una vez que se descubrió Taq Polymerase, reemplazó a E Coli Pol 1 en la tecnología PCR. La polimerasa Taq es una especie de ADN polimerasa termoestable que pertenece a Pol 1.
¿Cuáles son las similitudes entre el fragmento de Klenow y la ADN polimerasa 1?
- El fragmento de Klenow es una gran parte de la ADN polimerasa 1.
- Tienen actividad de polimerasa de ADN dependiente de ADN de 5' a 3' y actividad de exonucleasa de 3' a 5' que median en la corrección de pruebas.
- Se utilizan para múltiples propósitos.
¿Cuál es la diferencia entre el fragmento de Klenow y la ADN polimerasa 1?
La diferencia clave entre el fragmento Klenow y la ADN polimerasa 1 es que el fragmento Klenow carece de actividad de exonucleasa de 5′ a 3′, mientras que la ADN polimerasa 1 tiene actividad de exonucleasa de 5′ a 3′. Por lo tanto, el fragmento Klenow tiene dos dominios, mientras que la ADN polimerasa 1 tiene los tres dominios.
La siguiente infografía muestra más detalles de la diferencia entre el fragmento Klenow y la ADN polimerasa 1.
Resumen: fragmento de Klenow frente a ADN polimerasa 1
La ADN polimerasa 1 es una enzima de E. coli que tiene tres dominios como el dominio de polimerización de 5′ a 3′, el dominio de exonucleasa de 3′ a 5′ y el dominio de exonucleasa de 5′ a 3′. El fragmento Klenow es una gran parte de la ADN polimerasa. Carece de un dominio de ADN polimerasa 1, que es el dominio de exonucleasa 5 'a 3'. La diferencia clave entre el fragmento de Klenow y la ADN polimerasa 1 es que los fragmentos de Klenow no tienen un dominio de exonucleasa de 5′ a 3′, mientras que la ADN polimerasa 1 tiene un dominio de exonucleasa de 5′ a 3′.
