La diferencia clave entre Klenow y la ADN polimerasa T4 es que el fragmento Klenow es un fragmento grande de la ADN polimerasa 1 de E. coli, mientras que la ADN polimerasa T4 es la ADN polimerasa 1 del bacteriófago T4.
Las ADN polimerasas son enzimas que catalizan la formación de ADN mediante la adición de desoxirribonucleótidos al extremo 3′-OH de un cebador preexistente. Hay diferentes tipos de ADN polimerasas. La mayoría de las ADN polimerasas utilizadas en biología molecular son ADN polimerasas procarióticas. El fragmento Klenow y la ADN polimerasa T4 son dos tipos de ADN polimerasas que tienen un origen procariótico. El fragmento Klenow es el fragmento grande que se genera a partir de la escisión de E.coli ADN polimerasa 1 en dos fragmentos por la proteasa subtilisina bacteriana. La ADN polimerasa T4 es la ADN polimerasa 1 del bacteriófago T4. Tanto la ADN polimerasa Klenow como la T4 tienen actividad polimerasa 5′→3′ y exonucleasa 3′→5′. Ambos carecen de actividad de exonucleasa 5′→3′, lo que los hace más adecuados para muchas aplicaciones en biología molecular.
¿Qué es Klenow?
El fragmento Klenow es una ADN polimerasa útil en biología molecular. Cuando la ADN polimerasa 1 de E. coli se somete a digestión proteolítica por la proteasa bacteriana, subtilisina, da como resultado dos fragmentos: uno es un fragmento grande y el otro es un fragmento pequeño. El fragmento Klenow es el fragmento grande que tiene un tamaño de 68 kDa. El fragmento Klenow tiene actividades de polimerasa 5′→3′ y exonucleasa 3′→5′ (corrección de pruebas) de DNA Pol I. La actividad exonucleasa 3′→5′ del fragmento Klenow facilita la eliminación de bases añadidas incorrectamente a medida que avanza la polimerización. El fragmento Klenow no contiene actividad de exonucleasa 5′→3′, lo que se muestra en la E.coli ADN polimerasa 1. Es ventajoso cuando solo se necesita la actividad de polimerización sola. Los fragmentos de Klenow se utilizan para llenar los salientes 5', la síntesis de sondas, la secuenciación de ADN, la síntesis de ADN de doble cadena, la síntesis de la segunda cadena de ADNc y la mutagénesis dirigida al sitio.
Figura 01: Fragmento de Klenow
En ciertas aplicaciones, la actividad exonucleasa 3′→5′ del fragmento Klenow también se vuelve indeseable. Se puede eliminar introduciendo una mutación en el gen que codifica el fragmento Klenow. El fragmento Klenow resultante se conoce como fragmento exo-Klenow. Por lo tanto, el fragmento exo-Klenow solo tiene la actividad polimerasa 5′→3′ de la polimerasa 1 de E. coli.
¿Qué es la ADN polimerasa T4?
T4 La ADN polimerasa es una ADN polimerasa que cataliza la síntesis de ADN. Es una proteína codificada por el bacteriófago T4. Estructuralmente, la ADN polimerasa de T4 es una proteína de residuos de 898 aminoácidos (peso molecular de 103,6 kDa). Requiere una plantilla y un cebador para catalizar la síntesis.
Figura 02: ADN polimerasa T4
Al igual que el fragmento de Klenow, la ADN polimerasa T4 tiene actividades de polimerasa 5′→3′ y exonucleasa 3′→5′. Además, carece también de actividad exonucleasa 5′→3′. La ADN polimerasa de T4 es útil para rellenar los extremos 5' que sobresalen de los fragmentos de ADN. También se utiliza a menudo para el etiquetado del extremo 5′ o del extremo 3′ del ADN de doble cadena. La ADN polimerasa T4 se usa con frecuencia en la clonación roma. La actividad exonucleasa 3′→5′ (corrección) de la ADN polimerasa T4 es más fuerte (más de 200 veces) que el fragmento Klenow. Lo que es más importante, la ADN polimerasa T4 tiene una alta procesividad (400 nucleótidos por segundo).
¿Cuáles son las similitudes entre Klenow y la ADN polimerasa T4?
- Klenow y la ADN polimerasa T4 son dos polimerasas procarióticas.
- Ambas polimerasas tienen actividad polimerasa 5′→3′ y exonucleasa 3′→5′.
- No exhiben actividad exonucleasa 5′→3′.
- Ambas enzimas requieren una plantilla y un cebador para catalizar la síntesis de ADN.
- Estas enzimas se pueden inactivar por calor a 75 °0
¿Cuál es la diferencia entre Klenow y la ADN polimerasa T4?
La diferencia clave entre Klenow y la ADN polimerasa T4 es el origen de cada enzima. El fragmento Klenow se origina a partir de una bacteria, mientras que la ADN polimerasa T4 se origina a partir de un bacteriófago que es un virus. La ADN polimerasa T4 tiene una alta procesividad que el fragmento Klenow. Además, la ADN polimerasa T4 tiene una fuerte actividad de corrección de pruebas que el fragmento Klenow. Por lo tanto, esta es otra diferencia entre Klenow y la ADN polimerasa T4.
El siguiente gráfico informativo enumera más diferencias entre Klenow y la ADN polimerasa T4 en forma tabular.
Resumen: Klenow frente a ADN polimerasa T4
El fragmento Klenow es un fragmento grande de la ADN polimerasa 1 de E. coli. Solo tiene actividades 5′→3′ polimerasa y 3′→5′ exonucleasa. Carece de la actividad exonucleasa 5′→3′ del ADN intacto de E. coli pol 1. Por lo tanto, el fragmento Klenow es una polimerasa bacteriana. Por otro lado, la ADN polimerasa T4 es una polimerasa codificada por el bacteriófago T4. Similar al fragmento de Klenow, contiene actividades de polimerasa 5′→3′ y exonucleasa 3′→5′, y carece de actividad de exonucleasa 5′→3′. Sin embargo, la polimerasa de ADN T4 tiene una alta procesividad y una alta actividad de corrección de pruebas que el fragmento Klenow. Entonces, esta es la diferencia clave entre Klenow y la ADN polimerasa T4.
