La diferencia clave entre la traducción de muescas y el relleno final es que la traducción de muescas es un proceso que crea sondas de ADN marcadas para diversas reacciones de hibridación, mientras que el relleno final es una técnica que crea fragmentos romos al agregar nucleótidos en salientes monocatenarios.
La traducción de Nick y el relleno final son dos técnicas utilizadas en biología molecular. La traducción de Nick se usa para marcar sondas para hibridación con el fin de detectar secuencias de nucleótidos específicas. El relleno de extremos se usa para hacer fragmentos romos que tenían extremos pegajosos con voladizos de una sola hebra. Ambas técnicas tienen una gran importancia y se realizan de forma rutinaria en los laboratorios de investigación molecular.
¿Qué es la traducción de Nick?
La traducción de Nick es una técnica importante que se utiliza para preparar sondas marcadas para diversas técnicas de biología molecular, como transferencia, hibridación in situ, hibridación fluorescente in situ, etc. Es un método in vitro de marcaje de ADN. Las sondas de ADN se utilizan para identificar secuencias específicas de ADN o ARN. Con la ayuda de una sonda marcada, se pueden marcar o visualizar fragmentos específicos de una mezcla compleja de ácido nucleico. Por lo tanto, las sondas marcadas se preparan utilizando diversas técnicas. La traducción de Nick es uno de esos métodos que produce sondas marcadas con la ayuda de las enzimas ADNasa 1 y ADN polimerasa 1.
Figura 01: Traducción de Nick
El proceso de traducción de Nick comienza con la actividad de la enzima ADNasa 1. La ADNasa 1 introduce muescas en el esqueleto de fosfato del ADN de doble cadena al romper los enlaces fosfodiéster entre los nucleótidos. Una vez que se crea la muesca, se producirá el grupo OH 3 'libre del nucleótido y la enzima ADN polimerasa 1 actuará sobre él. La actividad exonucleasa de 5′ a 3′ de la ADN polimerasa 1 elimina los nucleótidos de la muesca hacia la dirección 3′ de la hebra de ADN.
Simultáneamente, la actividad polimerasa de la enzima ADN polimerasa 1 funciona y agrega nucleótidos para reemplazar los nucleótidos eliminados. Si los nucleótidos están marcados, el reemplazo se producirá por los nucleótidos marcados y marcará el ADN para su identificación. Finalmente, este ADN marcado recién sintetizado se puede utilizar como sonda en diversas reacciones de hibridación.
¿Qué es el relleno final?
El relleno de extremos es una técnica utilizada en biología molecular para hacer fragmentos romos. La digestión por restricción produce fragmentos con salientes. Estos fragmentos pueden no ser compatibles para ligarse en vectores plasmídicos. Los vectores a menudo se embotan para permitir que se unan extremos no compatibles. Por lo tanto, los fragmentos con salientes pueden hacerse romos agregando los nucleótidos a la cadena complementaria usando el saliente como molde para la polimerización. Este proceso se conoce como llenado final.
Las ADN polimerasas como el fragmento Klenow de la ADN polimerasa I y la ADN polimerasa T4 catalizan el llenado final. Agregan nucleótidos para completar (5′ → 3′) y masticar (3′ → 5′). Una vez que se llenan los extremos adhesivos, se vuelven romos y están listos para ligarse en un vector.
Además, el relleno final se puede utilizar para etiquetar moléculas de ADN. Sin embargo, solo se puede usar para marcar moléculas de ADN con extremos cohesivos. En comparación con la traducción de muescas, el relleno de extremos es un método más suave que rara vez provoca roturas en el ADN.
¿Cuáles son las similitudes entre la traducción de Nick y el relleno final?
- Tanto la traducción de muescas como el relleno final son técnicas de biología molecular.
- Se pueden utilizar para etiquetar sondas.
- Ambos son in vitro
¿Cuál es la diferencia entre la traducción de Nick y el relleno final?
La traducción de Nick es una técnica que crea sondas marcadas para la hibridación. Por el contrario, el relleno final es una técnica que crea fragmentos romos para ligarlos en vectores. Entonces, esta es la diferencia clave entre la traducción de nick y el relleno final. Además, la traducción de Nick requiere el uso de actividad de exonucleasa de 5' a 3', mientras que el llenado final no requiere actividad de exonucleasa de 5' a 3'.
La siguiente infografía tabula las diferencias entre la traducción del nick y el relleno final con más detalle.
Resumen: traducción de nick frente a relleno final
La traducción de Nick es un método que incorpora nucleótidos radiomarcados en el ADN. Sintetiza sondas marcadas basadas en las actividades de las enzimas ADNasa 1 y ADN polimerasa 1 de E. coli. El relleno de extremos, por otro lado, es una técnica que produce fragmentos romos. Cuando los fragmentos tienen extremos pegajosos (salientes monocatenarios), es necesario hacerlos extremos romos para ligarlos en vectores. El relleno de extremos agrega nucleótidos compatibles y crea fragmentos de extremos romos para hacerlos compatibles para la ligadura. Por lo tanto, esto resume la diferencia entre la traducción de nick y el relleno final.
