Diferencia clave: imprimación directa frente a inversa
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es un método de amplificación de ADN que se utiliza en aplicaciones de biología molecular. Es una técnica de uso común que hace de millones a miles de millones de copias de una secuencia de ADN particularmente interesada. Es un método in vitro realizado en laboratorios. La técnica de PCR depende totalmente de la polimerasa de ADN producida comercialmente llamada polimerasa Taq. Y también requiere varios otros componentes y un mantenimiento adecuado de la temperatura. Un componente importante son los cebadores. Los cebadores son las secuencias de ADN cortas diseñadas específicamente para la secuencia de ADN objetivo. Por lo general, tienen alrededor de 20 nucleótidos de longitud. La polimerasa Taq cataliza la adición de nucleótidos en una secuencia de nucleótidos preexistente. Por lo tanto, los cebadores sirven como puntos de partida para la síntesis de nuevas hebras. La polimerasa Taq funciona solo en la dirección 5 'a 3', por lo que la síntesis de ADN ocurre en la misma dirección 5 'a 3'. Dado que el ADN es de doble cadena, se necesitan dos tipos de cebadores en la PCR. Se les conoce como cebador directo y cebador inverso. Los cebadores directos e inversos se denominan en función de la dirección de elongación del cebador en el ADN cuando se produce la síntesis de ADN. El cebador directo se hibrida con la hebra de ADN antisentido e inicia la síntesis de la hebra +ve del gen en la dirección 5' a 3'. El cebador inverso se hibrida con la hebra sentido e inicia la síntesis de la hebra complementaria de la hebra codificante; que es –ve la hebra del gen en la dirección 5'a 3'. Esta es la diferencia clave entre los cebadores directo e inverso.
¿Qué es un Forward Primer?
La orientación hacia adelante es la síntesis de la hebra codificante o la hebra sentido de un gen. La polimerasa Taq cataliza la síntesis de una nueva hebra en la dirección 5' a 3'. La síntesis de la cadena codificante se produce cuando el cebador se hibrida con la cadena no codificante o antisentido y se alarga en una dirección de 5' a 3'.
Figura 01: Cebadores directos e inversos
El cebador que se hibrida con la hebra antisentido, la hebra no codificante o la hebra plantilla se conoce como cebador directo, ya que el cebador directo actúa como punto de partida para la síntesis de la cadena codificante o positiva del gen. El cebador directo tiene una secuencia de nucleótidos corta que es complementaria al extremo 3' que flanquea la cadena antisentido. Se hibrida con la cadena antisentido y facilita que la polimerasa Taq agregue nucleótidos que son complementarios a la cadena molde.
¿Qué es un cebador inverso?
El cebador inverso es la secuencia corta de ADN que se hibrida con el extremo 3' de la hebra sentido o la hebra codificante. El cebador inverso sirve como punto de partida para sintetizar una cadena complementaria de la secuencia codificante o la secuencia no codificante. El cebador inverso está diseñado como complemento del extremo 3' de la cadena codificante. Por lo tanto, se hibrida con el extremo 3' flanqueante de la cadena codificante y permite que la polimerasa Taq sintetice la cadena antisentido o la cadena plantilla. Dado que su orientación es inversa, este cebador está etiquetado como cebador inverso.
Tanto los cebadores inversos como los directos son importantes para la producción de millones a miles de millones de copias de regiones particulares de ADN que son objetivo o están interesadas.
¿Cuáles son las similitudes entre la cartilla directa y la inversa?
- Tanto los cebadores directos como los inversos están hechos de oligonucleótidos.
- Tanto los cebadores directos como los inversos poseen una secuencia de nucleótidos corta complementaria a los extremos flanqueantes de las cadenas dobles de ADN.
- Tanto los cebadores directos como los inversos suelen constar de 20 nucleótidos.
- Tanto los cebadores directos como los inversos se utilizan en las reacciones en cadena de la polimerasa.
- Tanto los cebadores directos como los inversos se sintetizan comercialmente.
- Tanto los cebadores directos como los inversos son estables a la temperatura y normalmente tienen Tm similares.
- Tanto los cebadores directos como los inversos se hibridan con las secuencias de ADN diana.
- Tanto los cebadores directos como los inversos están diseñados de acuerdo con las reacciones de la PCR.
- Tanto los cebadores directos como los inversos sirven como puntos de partida para la amplificación del ADN.
- Tanto los cebadores inversos como los directos son importantes para la producción de millones de copias de regiones particulares de secuencias de ADN específicas o interesadas.
¿Cuál es la diferencia entre el cebador directo y el inverso?
Imprimación directa frente a imprimación inversa |
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| El cebador directo es la secuencia corta de ADN que se hibrida con el extremo 3' de la hebra molde o no codificante del gen y sirve como punto de partida para sintetizar la secuencia codificante. | El cebador inverso es la secuencia corta de ADN que se hibrida con el extremo 3' de la hebra codificante o no plantilla y sirve como punto de partida para sintetizar la secuencia no codificante. |
| Hilo de recocido | |
| Recocido de imprimación directa con hebra plantilla. | El primer inverso recoce con la hebra que no es plantilla. |
| Nueva secuencia resultante | |
| El cebador directo facilita la síntesis de la secuencia codificante. | El cebador inverso facilita la síntesis de la secuencia no codificante. |
Resumen: Introducción directa frente a inversa
Hay dos tipos de cebadores involucrados en la técnica de PCR. Son cebadores directos e inversos. En función de la elongación del cebador en la síntesis de nuevas cadenas de ADN, estos cebadores se etiquetan o nombran. La polimerasa Taq sintetiza el nuevo ADN en una orientación de 5' a 3'. Por lo tanto, los cebadores se diseñan como complementarios a los extremos 3' de las cadenas dobles. El cebador directo que se alarga en la dirección 5' a 3' se hibrida con el extremo 3' de la secuencia antisentido o la plantilla o la secuencia no codificante. Sirve como punto de partida para sintetizar la secuencia de codificación. El cebador inverso que se alarga en la dirección 5' a 3' se hibrida con el extremo 3' de la cadena codificante o no plantilla o con sentido. Sirve como punto de partida para sintetizar la secuencia no codificante. Esta es la diferencia entre el cebador directo y el inverso.
