La diferencia clave entre Elisa y Elispot es que Elisa es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas que determina la concentración total de proteínas de señalización secretadas, mientras que Elispot es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas que detecta células secretoras de citoquinas individuales.
Elisa y Elispot son dos ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas ampliamente utilizados en medicina, fitopatología, biotecnología y diferentes industrias farmacéuticas. En estas técnicas, un analito proteico es detectado por un anticuerpo dirigido contra él. Elisa es el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas más popular utilizado en los laboratorios. Por otro lado, Elispot es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas que no se usa en lugar de Elisa sino que se usa además de Elisa en los laboratorios.
¿Qué es el ensayo Elisa?
Elisa es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas que determina la concentración total de proteínas de señalización secretadas. Es un ensayo de bioquímica analítica ampliamente utilizado que fue descrito por primera vez por Engvall y Perlmann en 1971. Esta técnica utiliza un tipo de inmunoensayo enzimático de fase sólida para detectar la presencia de una proteína específica en una muestra líquida utilizando anticuerpos dirigidos contra esta proteína específica. Este ensayo es una herramienta de diagnóstico comúnmente utilizada en medicina, fitopatología y biotecnología.
Mecanismo de la prueba ELISA
En la mayoría de las pruebas ELISA, al principio se inmoviliza una cantidad desconocida de antígeno en un soporte sólido (placa de microlitros). Luego, el anticuerpo primario correspondiente se aplica sobre la superficie de soporte sólida. Este anticuerpo forma un complejo con el antígeno (complejo antígeno-anticuerpo). El anticuerpo primario unido al antígeno se puede detectar mediante un anticuerpo secundario que se une a una enzima mediante bioconjugación. En el paso final de la prueba Elisa, se agrega una sustancia que contiene el sustrato de la enzima. Si hay una unión adecuada de un anticuerpo primario al antígeno, el sustrato produce un cambio de color detectable. En última instancia, esto cuantifica el antígeno en la muestra.
Figura 01: Diferentes tipos de Elisa
Además, existen diferentes enfoques de Elisa, como Elisa directa y Elisa indirecta. Actualmente, se utilizan varias pruebas de Elisa para detectar patógenos humanos como Mycobacterium tuberculosis, rotavirus, virus de la hepatitis B, virus de la hepatitis C, E.coli productor de enterotoxinas, VIH y SARS-CoV-2.
¿Qué es el ensayo Elispot?
Elispot es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas que detecta células secretoras de citoquinas individuales. Cecil Czerkinsky describió por primera vez ELISpot en 1983. Es un tipo de ensayo que se enfoca en medir cuantitativamente la frecuencia de secreción de citoquinas para una sola célula. También se clasifica como una técnica que utiliza anticuerpos para detectar un analito proteico biológico o químico. El ensayo Fluorospot es una variación del ensayo Elispot, que utiliza fluorescencia para analizar múltiples analitos (proteínas más secretas).
Mecanismo de la prueba Elispot
En este mecanismo, los anticuerpos monoclonales específicos de citocinas se agregan inicialmente a los pocillos de las placas de microlitros. Luego, las células deseadas que se observan se agregan a los pocillos. Más tarde, las células se incuban. Durante la incubación celular, se permite que las células reaccionen a cualquier estímulo y secreten citoquinas. Las citoquinas que han sido secretadas por las células incubadas se unirán a los anticuerpos ya que las células están rodeadas por anticuerpos monoclonales específicos de citoquinas.
Figura 02: Ensayo Elispot
Para detectar estos anticuerpos monoclonales específicos de citoquinas, se agregan al pocillo anticuerpos de detección específicos biotinilados. Los anticuerpos de detección específicos biotinilados capturan los anticuerpos monoclonales específicos de citocinas en los pocillos. Además, se añaden conjugados de estreptavidina-enzima a los pocillos para que se unan a los anticuerpos de detección. En el paso final, se agregan sustratos específicos a los pocillos. Las reacciones de los conjugados enzimáticos y los sustratos producen manchas distintas en los pocillos. Estos distintos puntos se leen en un lector ELISpot automatizado. En última instancia, esto calculará aún más la frecuencia de secreción de citoquinas.
¿Cuáles son las similitudes entre Elisa y Elispot?
- Ambos son ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas.
- Ambos ensayos detectan analitos proteicos específicos.
- Estos ensayos utilizan anticuerpos específicos para identificar los analitos proteicos.
- Ambos ensayos utilizan enzimas y sustratos.
- Se utilizan como herramienta de diagnóstico en laboratorios médicos.
¿Cuál es la diferencia entre Elisa y Elispot?
Elisa es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas que determina la concentración total de proteínas de señalización secretadas. Por otro lado, Elispot es un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas que mide las células secretoras de citoquinas individuales. Entonces, esta es la diferencia clave entre Elisa y Elispot. Además, en la prueba de Elisa, el antígeno se inmoviliza primero en los pocillos de microlitros. Por el contrario, en la prueba Elispot, el anticuerpo se inmoviliza primero en los pocillos de microlitros. Por lo tanto, esta es otra diferencia entre Elisa y Elispot.
La siguiente infografía presenta un análisis detallado de la diferencia entre Elisa y Elispot en forma tabular.
Resumen – Elisa contra Elispot
Elisa y Elispot son dos ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas ampliamente utilizados en medicina, fitopatología, biotecnología y diferentes industrias farmacéuticas. Elisa detecta la presencia de un ligando (proteína) en una muestra líquida utilizando anticuerpos dirigidos contra el ligando a medir. El ensayo Elispot es un método ampliamente utilizado para monitorear las respuestas inmunitarias. Detecta células secretoras de citoquinas individuales utilizando anticuerpos. Es una técnica tanto de inmunoensayo como de bioensayo. Así, este es el resumen de la diferencia entre Elisa y Elispot.
