La diferencia clave entre Golden Gate y Gibson Assembly es que Golden Gate se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular para ser clonada, mientras que Gibson Assembly no se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular para ser clonado.
Durante las últimas décadas, los científicos moleculares han desarrollado varios procedimientos estandarizados que permiten ensamblar más fácilmente múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza. Por lo tanto, los métodos de clonación como la ligadura de enzimas de restricción, la clonación de puerta de enlace, el ensamblaje de Gibson, el ensamblaje de Golden Gate y la clonación TOPO son ampliamente utilizados por los investigadores en experimentos científicos. Por lo tanto, Golden Gate y Gibson Assembly son dos métodos de clonación molecular que permiten ensamblar múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza.
¿Qué es la Asamblea Golden Gate?
Golden Gate es un método de clonación molecular que facilita el ensamblaje de múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza. Este método se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular que se va a clonar. Se originó en 1996. Esta técnica utiliza enzimas de restricción Tipo IIS y ADN ligasa T4. Estas enzimas cortan el ADN fuera de los sitios de reconocimiento. Pueden crear voladizos no palindrómicos. Por lo tanto, se pueden ensamblar múltiples fragmentos de ADN usando combinaciones de secuencias salientes.
Figura 01: Puerta Dorada
Procedimiento de ensamblaje Golden Gate
La técnica Golden Gate tiene tres pasos principales en su procedimiento:
- creación de voladizos en el vector de clonación,
- ensamblaje de múltiples insertos de ADN utilizando secuencias específicas de fragmentos en voladizos, y
- ligadura.
El ensamblaje Golden Gate utiliza vectores de clonación circulares (vector de destino). Además, en este método, el sitio de restricción se elimina del producto ligado para llevar a cabo la digestión y la ligadura simultáneamente. Un protocolo de ciclo térmico típico para Golden Gate oscila entre 37 °C y 16 °C porque 37 °C es óptimo para las enzimas de restricción y 16 °C es óptimo para las ligasas.
¿Qué es Gibson Assembly?
Gibson Assembly es un método de clonación molecular que permite ensamblar múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza. A diferencia del método Golden Gate, este método no se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular que se va a clonar. Fue encontrado por Daniel G. Gibson del Instituto J. Craig Venter. Esta técnica es un tipo de método de clonación independiente de secuencia y ligasa (SLIC).
Figura 02: Ensamblaje Gibson
Procedimiento de montaje de Gibson
Gibson Assembly necesita fragmentos de ADN que contengan 20-40 pares de bases superpuestos con fragmentos de ADN adyacentes. Las superposiciones se agregan a través de PCR. Luego, estos fragmentos de ADN se agregan a la mezcla máser de Gibson que tiene tres enzimas. Este procedimiento se lleva a cabo en condiciones isotérmicas (50 °C durante 1 hora) utilizando tres enzimas diferentes: exonucleasa, ADN polimerasa y ADN ligasa. La exonucleasa mastica el ADN desde el extremo 5'. Por lo tanto, no inhibe la actividad de la polimerasa y permite que la reacción se lleve a cabo en un solo proceso. Las regiones monocatenarias resultantes en fragmentos de ADN adyacentes pueden reasociarse debido a la superposición de secuencias. La ADN polimerasa llena los huecos añadiendo nucleótidos. Finalmente, la ADN ligasa se une covalentemente al ADN de los segmentos adyacentes. Normalmente, Gibson Assembly utiliza vectores de destino linealizados. Además, este método puede combinar simultáneamente hasta 15 fragmentos de ADN según la similitud de secuencia.
Similitudes entre Golden Gate y Gibson Assembly
- Golden Gate y Gibson Assembly son dos métodos de clonación molecular.
- Ambos métodos pueden ensamblar múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza.
- Estos métodos utilizan vectores de destino.
- Ambos métodos utilizan termocicladores para ensamblar múltiples fragmentos de ADN.
- Se utilizan en la mutagénesis dirigida al sitio.
Diferencia entre Golden Gate y Gibson Assembly
Golden Gate es un método de clonación molecular utilizado en el ensamblaje de múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza que se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular que se va a clonar, mientras que Gibson Assembly es un método de clonación molecular utilizado en la ensamblaje de múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza sin depender de la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular para ser clonada. Esta es la diferencia clave entre Golden Gate y Gibson Assembly. Además, el método Golden Gate utiliza un vector de destino circular, mientras que el método Gibson Assembly utiliza un vector de destino linealizado.
La siguiente infografía tabula la diferencia entre Golden Gate y Gibson Assembly.
Resumen: Golden Gate vs Asamblea Gibson
La clonación molecular es un método utilizado para ensamblar moléculas de ADN recombinante y dirigir su replicación dentro de los organismos huéspedes. Golden Gate y Gibson Assembly son dos métodos de clonación molecular que permiten ensamblar múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza. El método Golden Gate se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular que se clonará, mientras que Gibson Assembly no se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular que se clonará. Por lo tanto, esta es la diferencia clave entre Golden Gate y Gibson Assembly.
