La diferencia clave entre la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa y la ultracentrifugación en cojín de sacarosa es que en la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa se utiliza un gradiente de sacarosa continuo, mientras que en la ultracentrifugación en cojín de sacarosa se utiliza un gradiente de sacarosa discontinuo.
La ultracentrifugación en gradiente de sacarosa y en cojín de sacarosa son dos tipos similares de técnicas que se utilizan para separar tipos específicos de macromoléculas. En ambas técnicas se utiliza un gradiente de densidad de sacarosa. Pero en la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa, se usa un gradiente de densidad continuo mientras que, en la ultracentrifugación en cojín de sacarosa, se usa un gradiente de densidad discontinuo.
¿Qué es la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa?
La ultracentrifugación en gradiente de sacarosa es una técnica que se puede utilizar para fraccionar macromoléculas como ADN, ARN y proteínas. Hay varios pasos en esta técnica. Son preparación en gradiente de sacarosa, centrifugación, separación y elución. La preparación del gradiente es el paso clave en esta técnica. En esta técnica, la muestra que contiene macromoléculas de diferentes tamaños se coloca en capas sobre la superficie de una columna de gradiente de sacarosa. Al centrifugar, sedimentan macromoléculas de diferentes tamaños a través de la columna de gradiente de sacarosa a diferentes velocidades. La sedimentación depende de varios factores, incluida la fuerza de centrifugación, la forma del tamaño y la densidad de las macromoléculas, la densidad y la viscosidad del gradiente. Al final de la centrifugación, las macromoléculas se separan espacialmente por densidad. Las macromoléculas más grandes (macromoléculas de alta densidad) sedimentan hacia el fondo. Los más ligeros (macromoléculas de baja densidad) permanecen en la parte superior del gradiente. Por lo tanto, las moléculas se separan en bandas diferentes. Luego, las bandas deben separarse y debe realizarse la purificación de la macromolécula específica de la sacarosa.
Figura 01: Ultracentrifugación en gradiente de sacarosa
Por el lado de la aplicación, este método se usa ampliamente para el fraccionamiento de moléculas de ADN. La ultracentrifugación en gradiente de sacarosa se usa comúnmente para caracterizar el tamaño y la composición del complejo proteico. Además, esta técnica se utiliza para la purificación parcial de ARNm.
¿Qué es la ultracentrifugación en cojín de sacarosa?
La ultracentrifugación en cojín de sacarosa es otra técnica que permite el fraccionamiento de macromoléculas. A diferencia de la ultracentrifugación en gradiente de densidad de sacarosa, la ultracentrifugación en cojín de sacarosa utiliza un gradiente de densidad discontinuo. La concentración de sacarosa aumenta de arriba hacia abajo en pasos discretos. En esta técnica, la separación se logra colocando el extracto clarificado encima de un pequeño volumen de una solución de sacarosa en un tubo de centrífuga, el llamado cojín de sacarosa. Esto permite una mejor separación en la centrifugación de alta velocidad. Cuando las moléculas se separan como una banda entre el cojín de sacarosa, la banda blanca se puede recolectar y purificar. Además, las impurezas se pueden eliminar aún más utilizando el método de cojín de sacarosa. El método de cojín de sacarosa permite que el 60-70% del tubo se llene con la muestra. Por lo tanto, el método del colchón de sacarosa permite procesar un mayor volumen de muestra.
¿Cuáles son las similitudes entre la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa y en cojín de sacarosa?
- La ultracentrifugación en gradiente de sacarosa y en cojín de sacarosa son dos técnicas que se utilizan para separar una mezcla de macromoléculas.
- En ambos métodos se utiliza un gradiente de sacarosa.
- La centrifugación es un paso en ambos métodos.
- Las moléculas sedimentan como una banda o zona en cada método.
¿Cuál es la diferencia entre la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa y la ultracentrifugación en cojín de sacarosa?
La ultracentrifugación en gradiente de sacarosa es una técnica que utiliza un gradiente de sacarosa continuo en el tubo de centrífuga, mientras que la ultracentrifugación en cojín de sacarosa es una técnica que utiliza un gradiente de sacarosa discontinuo. Por lo tanto, esta es la diferencia clave entre la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa y la ultracentrifugación en cojín de sacarosa.
Además, la ultracentrifugación en cojín de sacarosa permite procesar un mayor volumen de la muestra, mientras que la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa permite procesar un volumen comparativamente bajo de la muestra.
La siguiente infografía tabula más diferencias entre el gradiente de sacarosa y la ultracentrifugación en cojín de sacarosa.
Resumen: gradiente de sacarosa frente a ultracentrifugación en cojín de sacarosa
La ultracentrifugación en gradiente de sacarosa separa las macromoléculas mediante un gradiente continuo de sacarosa. Por el contrario, la ultracentrifugación en cojín de sacarosa utiliza un gradiente discontinuo de sacarosa para separar un tipo específico de partículas en una mezcla. Entonces, esta es la diferencia clave entre el gradiente de sacarosa y la ultracentrifugación de cojín de sacarosa. El método del cojín de sacarosa permite la recolección de partículas morfológicamente intactas ya que no provoca estrés mecánico, a diferencia de la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa, que aplasta las moléculas hasta el fondo del tubo. Además, la ultracentrifugación en cojín de sacarosa permite procesar un mayor volumen de muestra que la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa.
