La diferencia clave entre el ensayo colorimétrico y el fluorométrico es que el ensayo colorimétrico determina la concentración de compuestos coloreados en una solución, mientras que el ensayo fluorométrico determina el mecanismo cinético de una solución.
Un ensayo bioquímico es una técnica que detecta o cuantifica analíticamente la actividad de una molécula o sustancia biológica. Es un proceso in vitro. El ensayo colorimétrico y el ensayo fluorométrico son dos tipos de ensayos bioquímicos comunes que se llevan a cabo en los laboratorios. Múltiples técnicas como ELISA y western blot también son ensayos bioquímicos complejos para la cuantificación de la actividad metabólica y la medición del comportamiento funcional de biomoléculas como proteínas, enzimas y otras moléculas pequeñas. Estos tipos de ensayos se utilizan para la identificación de interacciones proteína-ADN, proteína-ARN y proteína-proteína.
¿Qué es un ensayo colorimétrico?
Un ensayo colorimétrico es una técnica que determina la concentración de compuestos coloreados en una solución. En otras palabras, el ensayo colorimétrico es una reacción que conduce a un cambio de color debido a una reacción enzimática o química entre reactivos y analitos. Los ensayos colorimétricos se practican en bioquímica para analizar enzimas, compuestos específicos, hormonas, anticuerpos y otros analitos. Utilizan colorímetros o espectrofotómetros. Los colorímetros son instrumentos que caracterizan muestras coloreadas para proporcionar una medida objetiva de las características del color. Un espectrofotómetro es un dispositivo que mide la intensidad de la luz en función del color o la longitud de onda de la luz.
Figura 01: Ensayo colorimétrico
¿Cómo funciona un ensayo colorimétrico?
En un ensayo colorimétrico, se prepara una placa con un anticuerpo particular unido a los pocillos. Luego se agrega la muestra. Esto puede permitir que la muestra se una al anticuerpo. Luego se agregan un anticuerpo de detección y un sustrato a los pocillos para que reaccionen con la sonda de detección. La solución de parada se agrega al final antes de la lectura. Un pozo vacío llamado blanco se deja sin la muestra. En el ensayo colorimétrico, cuanto más oscuro es el color, mayor es la concentración de analito. Por lo general, solo se necesita una longitud de onda para tomar la lectura. Pero si hay una medida de referencia, se utilizan dos o más longitudes de onda.
¿Qué es un ensayo fluorométrico?
El ensayo fluorométrico es una técnica que determina el mecanismo cinético de las reacciones enzimáticas. Un ensayo fluorométrico tiene lugar con la formación de un producto fluorescente a partir de un sustrato no fluorescente o viceversa. Este ensayo también utiliza la transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET), donde la reacción enzimática cambia la posición de dos fluoróforos en el sustrato, cambiando así la intensidad de la fluorescencia.
Figura 02: Ensayo fluorométrico
Los ensayos fluorométricos son generalmente mucho más sensibles que otros ensayos. Las estimaciones de enzimas diagnósticas en muestras de tejidos, células o fluidos de pacientes aumentan debido a su mayor sensibilidad.
¿Cómo funciona un ensayo fluorométrico?
En un ensayo fluorométrico, se agrega un sustrato a la muestra en la placa y la respuesta de fluorescencia se toma con el lector de placas. Aquí, cada celda se mide por separado. Las placas opacas se utilizan en ensayos fluorométricos. Esto reduce la dispersión de la luz. Se necesitan dos longitudes de onda para este tipo de ensayo. Una longitud de onda es para detectar la excitación y la otra longitud de onda es para la emisión.
¿Cuáles son las similitudes entre el ensayo colorimétrico y el fluorométrico?
- El ensayo colorimétrico y el ensayo fluorométrico son dos tipos de ensayos bioquímicos.
- Ambos ensayos se realizan para diagnóstico médico.
- Estos ensayos involucran una reacción enzimática.
- Ambos ensayos involucran un sustrato y analitos.
¿Cuál es la diferencia entre el ensayo colorimétrico y el fluorométrico?
Un ensayo colorimétrico es una técnica que determina la concentración de compuestos coloreados en una solución, mientras que el ensayo fluorométrico es una técnica que determina el mecanismo cinético de las reacciones enzimáticas. Entonces, esta es la diferencia clave entre el ensayo colorimétrico y el fluorométrico. Además, los ensayos fluorométricos son más sensibles que los ensayos colorimétricos; por lo tanto, los ensayos fluorométricos tienen la capacidad de detectar más analitos. Por lo tanto, esta es otra diferencia importante entre el ensayo colorimétrico y el fluorométrico. Además, los ensayos fluorométricos requieren dos longitudes de onda, mientras que los ensayos colorimétricos se realizan con una longitud de onda.
La siguiente infografía tabula más diferencias entre los ensayos colorimétricos y fluorométricos.
Resumen: ensayo colorimétrico frente a fluorométrico
Un ensayo bioquímico es un proceso analítico utilizado para determinar y cuantificar reacciones metabólicas celulares. El ensayo colorimétrico y el ensayo fluorométrico son dos tipos de ensayos bioquímicos. El ensayo colorimétrico es una reacción que conduce a un cambio de color debido a una reacción enzimática o química entre los reactivos y los analitos, mientras que el ensayo fluorométrico es una técnica que se utiliza para determinar el mecanismo cinético de las reacciones enzimáticas. Ambos ensayos dependen de una reacción enzimática que involucra un sustrato y un analito. Los ensayos fluorométricos son más sensibles que los ensayos colorimétricos. Lo que es más importante, los ensayos fluorométricos requieren dos longitudes de onda, mientras que los ensayos colorimétricos se pueden realizar con una sola longitud de onda. Por lo tanto, esto resume la diferencia entre el ensayo colorimétrico y el fluorométrico.
