La diferencia clave entre BCA y el ensayo Bradford es que el ensayo BCA requiere mucho tiempo y es menos preciso, mientras que el ensayo Bradford es rápido y preciso.
BCA y el ensayo de Bradford son dos métodos de ensayo para determinar la concentración de proteínas. Estos dos ensayos tienen diferentes principios de ensayo y diferencias en sus precisiones.
¿Qué es el ensayo BCA?
El ensayo BCA o ensayo de ácido bicinconínico es un ensayo bioquímico útil para determinar la concentración total de proteína en una solución. Este método también recibe el nombre de ensayo de Smith en honor a su inventor, Paul K. Smith. Este método analítico muestra similitudes con el ensayo de proteínas de Lowry, el ensayo de proteínas de Bradford o el reactivo de biuret. Podemos observar la concentración de proteína total en una muestra dada a través de un cambio de color de la solución de muestra, que va de verde a púrpura. Este cambio de color ocurre en proporción al contenido de proteína. Posteriormente, podemos utilizar una técnica colorimétrica para analizar la intensidad del color y el contenido de proteína en la muestra.
Método BCA de estimación de proteínas
Al considerar el mecanismo del ensayo BCA, la solución BCA típica contiene una solución altamente alcalina con un pH de casi 11,25, y los ingredientes de esta solución incluyen ácido bicinconínico, carbonato de sodio, bicarbonato de sodio, tartrato de sodio y sulfato de cobre(II) pentahidratado. Este ensayo depende principalmente de dos reacciones químicas: la reducción de cobre (II) a cobre (I) por los enlaces peptídicos en la proteína y la quelación de dos moléculas de ácido bicinconínico con iones de cobre (I), lo que da como resultado un complejo de color púrpura que puede absorben luz a una longitud de onda de 562 nm. En la primera reacción, la cantidad de cobre (II) reducida por enlaces peptídicos es proporcional a la cantidad de proteína en la muestra.
¿Qué es el ensayo de Bradford?
El ensayo de Bradford es un método analítico espectroscópico útil para medir la concentración de proteína en una solución. Este método fue desarrollado por Marion M. Bradford en 1976 y es un método comparativamente rápido y preciso.
Reacción de color de proteína y reactivo de Bradford
Podemos usar este método para determinar la concentración de la cantidad de proteína en una muestra. La reacción química que tiene lugar en la muestra durante este ensayo depende únicamente de la composición de aminoácidos de la proteína en la muestra.
Método Bradford de estimación de proteínas
Al considerar el método de este ensayo, se trata de un ensayo colorimétrico de proteínas que se basa en el cambio de absorbancia del tinte llamado Coomassie Brilliant Blue G-250. Generalmente, este tinte existe en tres formas: forma aniónica (azul), forma neutra (verde) y forma catiónica (roja). Por lo tanto, bajo condiciones ácidas, el tinte cambia su color de rojo a azul. Esto se debe a la unión de la proteína con el tinte. Por el contrario, si no hay proteína para unir con el tinte, el cambio de color no aparece, la solución adquiere un color marrón rojizo. Este colorante es capaz de formar un fuerte complejo no covalente con el grupo carboxilo de la proteína mediante fuerzas de Van der Waal y atracciones electrostáticas.
¿Cuál es la diferencia entre BCA y el ensayo de Bradford?
BCA y el ensayo de Bradford son dos métodos de ensayo para determinar la concentración de proteínas. Estos dos ensayos tienen diferentes principios de ensayo y diferencias en sus precisiones. La diferencia clave entre el ensayo BCA y Bradford es que el ensayo BCA requiere mucho tiempo y es menos preciso, mientras que el ensayo Bradford es rápido y preciso.
La siguiente infografía resume las diferencias entre BCA y el ensayo de Bradford en forma tabular.
Resumen: ensayo BCA frente a Bradford
El ensayo BCA o ensayo de ácido bicinconínico es un ensayo bioquímico útil para determinar la concentración total de proteína en una solución. El ensayo de Bradford es un método analítico espectroscópico útil para medir la concentración de proteína en una solución. La diferencia clave entre BCA y el ensayo de Bradford es que BCA requiere mucho tiempo y es menos preciso, mientras que el ensayo de Bradford es rápido y preciso.
