Diferencia clave: sonda frente a cebador
La sonda molecular es un pequeño fragmento de ADN o ARN que reconoce las secuencias complementarias en el ADN o ARN y permite la identificación de la secuencia diana. El cebador es un pequeño tramo de ADN o ARN que sirve como punto de partida para la síntesis de ADN. Los cebadores y las sondas se hibridan con los nucleótidos complementarios del ADN molde o el ADN diana. Sin embargo, la diferencia clave entre la sonda y el cebador es que los cebadores son necesarios para la replicación del ADN, mientras que las sondas son necesarias para la detección de secuencias específicas en el ADN de la muestra.
¿Qué es una sonda?
La sonda es un pequeño fragmento de ADN o ARN que se utiliza para detectar el ADN o ARN diana en la muestra mediante hibridación molecular. También se conocen como marcadores moleculares. La longitud de la sonda puede variar (100 a 1000 bases) y los nucleótidos de la sonda son complementarios a la parte de la secuencia diana. Para facilitar la detección, las sondas se marcan con isótopos radiactivos o con tintes fluorescentes o anticuerpos. Las sondas se unen a las bases complementarias de la secuencia objetivo y revelan la presencia del ADN o ARN objetivo en la muestra. Hay dos métodos principales de etiquetado de sondas: etiquetado final y traducción de mella. Las sondas se clasifican en diferentes tipos, incluidas sondas de ADN, sondas de ARN, sondas de ADNc y sondas de oligonucleótidos sintéticos, y se preparan utilizando diferentes técnicas.
Las sondas son herramientas importantes en muchas áreas microbianas y moleculares, como virología, patología forense, pruebas de paternidad, huellas dactilares de ADN, detección de enfermedades genéticas, RFLP, citogenética molecular, hibridación in situ, etc.
Figura 01: Sonda marcada con fluorescencia utilizada en FISH para la detección de patógenos
¿Qué es una cartilla?
Primer es un fragmento corto de ADN o ARN que sirve como iniciador para la síntesis de ADN. La enzima ADN polimerasa agrega nucleótidos al grupo 3' OH de la secuencia del cebador y sintetiza la nueva hebra complementaria al ADN molde. Los cebadores son fragmentos muy cortos con una longitud de 18 a 20 nucleótidos. Se sintetizan químicamente en el laboratorio para la amplificación de ADN in vitro (PCR). Los cebadores pueden tener cualquier secuencia de nucleótidos ya que son diseñados por el usuario. Se sintetizan para que coincidan con las bases complementarias del ADN molde. Por lo tanto, puede tener cualquier secuencia de nucleótidos. Los cebadores son de suma importancia para la replicación del ADN, ya que la ADN polimerasa no puede sintetizar ADN nuevo sin una pieza de ADN preexistente. Al diseñar los cebadores para PCR, se deben tener en cuenta los siguientes aspectos:
- Los cebadores deben contener los nucleótidos complementarios al extremo flanqueante del ADN que se quiere amplificar.
- Las imprimaciones deben tener una temperatura de fusión entre 55 y 65 °C 0C
- El contenido de G y C debe estar entre 50 y 60%.
En la PCR se utilizan dos cebadores, directo e inverso, para replicar ambas cadenas del ADN de la muestra. Los cebadores se utilizan comúnmente para realizar PCR y secuenciación de ADN.
Figura 02: Recocido de cebadores en PCR
¿Cuál es la diferencia entre Probe y Primer?
Sonda vs Cebador |
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| La sonda es un pequeño fragmento de ADN/ARN que se utiliza para detectar la presencia de la secuencia diana en una muestra mediante hibridación molecular. | Primer es una pequeña porción de ADN o ARN que sirve como punto de partida para la replicación del ADN. |
| Función | |
| Esto detecta la presencia de una secuencia específica en la muestra de ADN o ARN. | Esto actúa como punto de partida para la síntesis de ADN. |
| Longitud | |
| La longitud puede estar en el rango de 100 a 1000 bases | La longitud es generalmente de 18 a 20 bases |
| Enlace con secuencia complementaria | |
| La sonda se hibrida con las bases complementarias de la secuencia diana | Primer se hibrida con las bases complementarias de las hebras de ADN. |
| Etiquetado | |
| Las sondas están etiquetadas para facilitar su detección | Las imprimaciones generalmente no están etiquetadas |
| Uso en PCR | |
| Las sondas no se utilizan en PCR | Los cebadores se utilizan en PCR |
Resumen: sonda frente a cebador
La sonda es un pequeño fragmento de secuencia de ADN o ARN que se puede hibridar con nucleótidos complementarios para detectar una secuencia diana en la muestra. Las sondas se marcan de forma radiactiva, inmunológica o fluorescente para ver la presencia de la secuencia objetivo. El cebador es un fragmento muy pequeño de ADN o ARN que actúa como punto de partida para la amplificación de ADN in vitro. La ADN polimerasa identifica el cebador del grupo OH 3 'e inicia la construcción de una nueva cadena complementaria a la plantilla. Las sondas y los cebadores funcionan de manera similar mediante la hibridación con nucleótidos complementarios. Por lo tanto, la diferencia clave entre la sonda y el cebador es su función principal.
