PCR frente a PCR en tiempo real
PCR o reacción en cadena de la polimerasa es un descubrimiento revolucionario en la biología molecular moderna, que fue desarrollado por primera vez por el químico Kary Mullis en 1983. Permite amplificar una sola secuencia en un ADN complejo para su análisis. La idea básica de la PCR es que dos cebadores, que son complementarios a las hebras opuestas de una secuencia de ADN, se orientan uno hacia el otro; los cebadores producen cadenas complementarias, cada una de las cuales contiene el otro cebador. Por tanto, el resultado es una gran cantidad de una secuencia correspondiente al ADN que se encuentra entre los dos cebadores. La enzima ADN polimerasa se utiliza para extender los cebadores en la PCR. La ADN polimerasa es una enzima termoestable y tiene la capacidad de sobrevivir a altas temperaturas (94 a 95 °C) utilizadas para la desnaturalización del ADN molde.
La PCR consta de tres pasos, a saber, rondas repetidas de desnaturalización, hibridación de cebadores y síntesis de ADN. Se utiliza una máquina termocicladora para realizar esta reacción de modo que pueda programarse para cambiar las temperaturas de forma rápida y precisa. Las aplicaciones de la PCR son investigaciones criminales, huellas dactilares de ADN, detección de patógenos y análisis de ADN de las primeras especies humanas.
¿Qué es la PCR convencional?
Hay tres etapas principales de la PCR convencional, a saber; Etapa de amplificación de ADN, separación de PCR y detección de productos. La separación de los segmentos de ADN se realiza normalmente mediante electroforesis en gel de agarosa. A continuación, los productos se tiñen con bromuro de eteiduim. Finalmente, la detección se logra mediante la visualización de bandas en geles bajo luz ultravioleta. Por lo tanto, los resultados finales de la PCR convencional no se expresan en números. Normalmente la PCR convencional solo es capaz de detectar un único parámetro.
¿Qué es la PCR en tiempo real?
La PCR en tiempo real puede detectar la amplificación de productos, a medida que se sintetizan los productos. Con el desarrollo de la tecnología, la PCR se ha convertido en una técnica muy popular, especialmente para la detección e identificación de bacterias en los alimentos. La PCR en tiempo real utiliza un sistema de tinción fluorescente y un termociclador equipado con capacidad de detección de fluorescencia.
¿Cuál es la diferencia entre PCR convencional y PCR en tiempo real?
• La PCR convencional requiere más tiempo ya que utiliza electroforesis en gel para analizar los productos de PCR amplificados. Por el contrario, la PCR en tiempo real consume menos tiempo, ya que puede detectar amplificaciones durante las primeras fases de la reacción.
• La PCR en tiempo real recopila datos en la fase de crecimiento exponencial de la PCR, mientras que la PCR tradicional recopila datos en el punto final de la reacción.
• Los resultados del punto final de la PCR convencional pueden no ser muy precisos, pero los resultados de la PCR en tiempo real son muy precisos.
• La PCR en tiempo real es más sensible que la PCR convencional.
• La PCR convencional tiene una resolución muy baja, mientras que la PCR en tiempo real puede detectar muy pocos cambios debido a la alta resolución.
• La detección del punto final de la PCR convencional tiene un rango dinámico corto, mientras que la detección de la PCR en tiempo real tiene un rango dinámico amplio.
• A diferencia de la PCR convencional, las técnicas de detección automatizadas se encuentran en la PCR en tiempo real.
• La PCR convencional es muy sofisticada y requiere más mano de obra que la PCR en tiempo real.
• A diferencia de la PCR en tiempo real, la PCR convencional no puede discriminar entre bacterias muertas y vivas.
• La PCR en tiempo real utiliza un sistema de tinción fluorescente para detectar los productos, mientras que la PCR convencional utiliza bromuro de etidio y luz ultravioleta para visualizar las bandas en el medio de gel de agarosa.
