Diferencia clave: HPLC frente a HPTLC
La diferencia clave entre HPLC y HPTLC es que HPLC permite la separación cuantitativa de componentes en una muestra, mientras que HPTLC no permite la separación cuantitativa de componentes en una muestra.
La cromatografía es un método de separación física que se utiliza para separar e identificar los componentes de una mezcla. Tanto HPLC como HPTLC son técnicas cromatográficas. HPLC es cromatografía líquida de alta resolución. HPTLC es cromatografía en capa fina de alto rendimiento.
¿Qué es HPLC?
HPLC es cromatografía líquida de alta resolución. Es una técnica analítica utilizada para separar, identificar y cuantificar los componentes de una mezcla. En esta técnica, la muestra se disuelve en un solvente adecuado. Luego, el solvente con la muestra se pasa a través de una bomba con una presión determinada. La bomba está llena de material adsorbente sólido. Luego, algunos componentes se unen fuertemente al material absorbente mientras que otros componentes se unen de forma suelta. Esto hace que los componentes tengan diferentes caudales a través de la bomba. Por lo tanto, los componentes se pueden separar fácilmente.
Figura 01: Un sistema HPLC
El material adsorbente que llena la bomba se conoce como fase estacionaria. El solvente con la muestra disuelta se conoce como fase móvil. La bomba utilizada en esta técnica se denomina columna. La columna se llena con un material adsorbente, más comúnmente, partículas de sílice. El tamaño de estas partículas puede oscilar entre 2 y 50 μm. El proceso de separación se ve afectado por la composición de la fase móvil y la temperatura del sistema. Las interacciones entre la fase estacionaria y el componente de la muestra pueden ser interacciones hidrofóbicas, interacciones dipolo-dipolo, enlaces iónicos, etc.
La presión de operación de la HPLC es considerablemente más alta que la de la cromatografía líquida tradicional. Se encuentra alrededor de 50-350 bar. La diferencia entre la cromatografía líquida y la HPLC es que, en la cromatografía líquida, la muestra cae a través de la columna por gravedad, mientras que en la HPLC, la muestra se presuriza a través de la columna. El tamaño de la columna y las partículas absorbentes también son muy pequeños en comparación con la cromatografía líquida tradicional. Sin embargo, la resolución que da la técnica HPLC es superior.
¿Qué es HPTLC?
HPTLC es cromatografía en capa fina de alto rendimiento. Es la forma avanzada y automatizada de TLC tradicional. Esta técnica proporciona una resolución eficiente en un corto período de tiempo. En este método de análisis, la muestra y una referencia se pueden analizar al mismo tiempo, lo que permite comparar la muestra con la referencia. Da una precisión analítica mejorada que otras técnicas cromatográficas. El tiempo necesario para el análisis es menor. La técnica es una técnica de bajo costo.
Figura 02: Análisis de colorantes alimentarios mediante HPTLC
El método HPTLC es un proceso simple y también se elimina el paso de preparación de la muestra (en la TLC tradicional, el paso de preparación de la muestra se incluye antes de la separación. Este paso implica la limpieza y el enriquecimiento). El disolvente se puede utilizar directamente sin ningún tratamiento previo, aunque otras técnicas cromatográficas requieren tratamientos previos como desgasificación, filtración, etc.
El material adsorbente utilizado en HPTLC es sílice con partículas de tamaño muy pequeño. En TLC tradicional, el tamaño de partícula de sílice es de 5-20 μm mientras que, en HPTLC, es de 4-8 μm. La muestra se aplica a la placa de HPTLC utilizando un aplicador. Da una aplicación uniforme y segura. Luego, las placas se colocan en una cámara que tiene la fase móvil. La cámara debe estar saturada con el vapor de la fase móvil. Después del proceso de HPTLC, se pueden detectar los puntos que se han movido. Al detectar las manchas en la placa, la técnica HPTLC utiliza una región UV adecuada o una cámara de yodo.
¿Cuál es la diferencia entre HPLC y HPTLC?
HPLC frente a HPTLC |
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| HPLC es cromatografía líquida de alta resolución. | HPTLC es cromatografía en capa fina de alto rendimiento. |
| Técnica | |
| En HPLC, la fase móvil con el solvente se pasa a través de una columna llena con la fase estacionaria. | En HPTLC, la muestra se coloca en una placa de TLC y se coloca dentro de una cámara que contiene la fase móvil; luego se permite que la muestra migre hacia arriba de la placa junto con la fase móvil. |
| Medida | |
| En HPLC, las diferencias entre los caudales de los componentes a través de la columna se utilizan para separar los componentes de la muestra. | En HPTLC, las diferencias entre las distancias recorridas por cada componente de la muestra se utilizan para separar los componentes de la muestra. |
| Separación cuantitativa | |
| HPLC permite la separación cuantitativa de componentes en una muestra. | HPTLC no permite la separación cuantitativa de componentes en una muestra. |
Resumen: HPLC frente a HPTLC
HPLC y HPTLC son dos técnicas cromatográficas. La diferencia clave entre HPLC y HPTLC es que HPLC permite la separación cuantitativa de componentes en una muestra, mientras que HPTLC no permite la separación cuantitativa de componentes en una muestra.
