Diferencia clave: clonación frente a subclonación
La clonación y la subclonación son procedimientos de biología molecular que crean células u organismos genéticamente idénticos que portan el ADN o el gen de interés. La clonación es una técnica que implica la inserción del gen o ADN interesado en un vector, su replicación dentro de una bacteria huésped y la producción de células u organismos que son copias exactas de la composición genética. La subclonación es una técnica que implica la inserción del gen de interés, que ya está insertado en un vector, en un vector secundario, su replicación dentro de una bacteria huésped y la producción de copias genéticamente idénticas de células u organismos. La diferencia clave entre la clonación y la subclonación es que, en la clonación, el gen de interés, una vez ligado a un vector, continúa el proceso de clonación mientras que, en la subclonación, el gen de interés ya clonado se separa del vector original y se inserta nuevamente en un vector receptor y continuar el proceso.
¿Qué es la clonación?
La clonación es el procedimiento que produce organismos o células genéticamente idénticos. En la naturaleza, la clonación ocurre en los medios de reproducción asexual. Cuando no hay recombinación o alteración genética, las células hijas reciben la misma composición genética del padre. Los organismos procarióticos y eucarióticos crean clones por fisión binaria, brotación, mitosis, etc. En biología molecular, la clonación de genes o fragmentos específicos de ADN es un método popular para estudiar la estructura y función de esa sección de ADN en particular.
El objetivo principal de la clonación molecular es hacer millones de copias de células u organismos genéticamente idénticos que portan el fragmento de ADN de interés (principalmente genes). Crea organismos con copias genéticas exactas de otro. Principalmente, se clonan genes específicos en estudios moleculares para obtener información estructural y funcional y para la secuenciación del ADN. Además, para la producción de proteínas o productos específicos a gran escala, la clonación es muy utilizada.
Procedimiento de clonación
Los pasos básicos del procedimiento de clonación son los siguientes.
- Identificación y aislamiento del gen de interés. (Amplificación del gen de interés por PCR).
- Digestión de restricción del gen de interés (la endonucleasa de restricción corta el gen).
- Digestión de restricción del vector de ADN. (El ADN del vector también se corta con la misma endonucleasa de restricción).
- Inserción del gen en el vector y formación de la molécula recombinante.
- Transformación del vector recombinante en una bacteria huésped.
- Aislamiento e identificación de las bacterias transformadas (el vector plásmido debe contener un gen seleccionable, más comúnmente un gen de resistencia a antibióticos para detectar bacterias transformadas).
- Expresión génica recombinante dentro del huésped.
Figura_01: Procedimiento de clonación
¿Qué es la subclonación?
La subclonación es un procedimiento de mover un gen de interés de un vector a otro vector para ver la expresión del gen y obtener la funcionalidad deseada del gen. En este método están involucrados dos vectores; a saber, vector padre y vector de destino. Las inserciones clonadas se mueven nuevamente a un segundo vector en la subclonación. El objetivo de transferir el gen del primer vector al segundo vector es obtener algo que el primer vector no podría hacer o volver a separar un gen dentro del fragmento de ADN ya clonado y expresarlo solo. Las enzimas de restricción se utilizan en este procedimiento al principio.
Procedimiento de subclonación
Los pasos básicos de la subclonación son los siguientes.
- Con la ayuda de endonucleasas de restricción, separación del ADN de interés en el plásmido donante (vector padre).
- Amplificación del ADN de interés mediante PCR.
- Purificación del producto PCR (ADN de interés) por electroforesis en gel.
- Apertura del plásmido receptor por las mismas endonucleasas de restricción utilizadas para separar el ADN de interés en el plásmido original.
- Ligadura del ADN de interés (gen) en el plásmido receptor para crear el plásmido subclonado.
- Transformación del vector subclonado en una bacteria huésped competente.
- Evaluación de células transformadas.
- Purificación del ADN plasmídico y uso para la secuenciación del ADN o la expresión de los genes para obtener los productos deseados.
La subclonación se lleva a cabo cuando se aísla un gen del grupo de genes clonados o cuando se requiere transferir el gen de interés a un plásmido útil para ver la función exacta del gen de interés.
Figura_02: Procedimiento de subclonación
¿Cuál es la diferencia entre clonación y subclonación?
Clonación frente a subclonación |
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| La clonación es el procedimiento que produce organismos o células genéticamente idénticos. | La subclonación es un procedimiento de mover un gen de interés de un vector a otro vector para ver la expresión del gen y obtener la funcionalidad deseada del gen. |
| Proceso | |
| Separar el ADN de interés del organismo e insertarlo en un vector una vez y clonarlo | El ADN ya clonado se separa del primer vector, se inserta en un segundo vector y se clona. |
| Insertar movimiento a través de vectores | |
| No mueve insertos (ADN de interés) de un vector a otro vector. | Mover inserciones del vector principal al vector de destino. |
Resumen: clonación frente a subclonación
La clonación crea células u organismos genéticamente idénticos con el gen insertado o el ADN de interés. Procede a través de la separación e inserción del ADN de interés en un vector y expresión dentro de una bacteria huésped. La subclonación comparte pasos similares con la clonación. Sin embargo, en la subclonación, el fragmento de ADN ya clonado (gen de interés) se inserta en un vector y se transforma en una bacteria huésped. Esa es la diferencia clave entre la clonación y la subclonación.
