La diferencia clave entre el enfoque cromatográfico y el enfoque isoeléctrico es que el enfoque cromatográfico es un tipo de método de cromatografía en columna que utiliza resinas de intercambio iónico, mientras que el enfoque isoeléctrico es un tipo de técnica de electroforesis que utiliza geles de gradiente de pH inmovilizados.
El cromatoenfoque y el enfoque isoeléctrico son dos técnicas que separan las proteínas según sus puntos isoeléctricos. Tanto el enfoque cromatográfico como el isoeléctrico tienen un gran poder de resolución. El enfoque cromático es un método de cromatografía en columna de alta resolución, mientras que el enfoque isoeléctrico es un método de separación electroforética. Además, el enfoque cromático no utiliza un campo eléctrico, mientras que el enfoque isoeléctrico necesita un campo eléctrico.
¿Qué es el cromatoenfoque?
Chromatofocusing es un tipo de cromatografía de alta elución que separa las proteínas según las diferencias en su punto isoeléctrico. Utiliza una columna de resina de intercambio iónico y un gradiente de pH desarrollado internamente. A diferencia del enfoque isoeléctrico, el enfoque cromatográfico no implica un campo eléctrico. Chromatofocusing es una poderosa técnica de purificación que puede resolver moléculas muy similares, incluso si solo difieren en 0,02 unidades de pH. Por lo tanto, el cromatoenfoque es más adecuado como paso final de pulido cuando se requiere alta resolución para separar componentes muy similares.
En el cromatoenfoque, la muestra se aplica a la columna mezclándola con el tampón de inicio. Las proteínas que tienen un pH por encima de su punto isoeléctrico tienen carga negativa y permanecen cerca de la parte superior de la columna, mientras que otras proteínas que tienen un pH por debajo de su punto isoeléctrico migran hacia abajo de la columna. La proteína con el punto isoeléctrico más alto se eluye primero, mientras que la proteína con el punto isoeléctrico más bajo se eluye en último lugar de la columna. Esta técnica se ve afectada por varios factores, como la precipitación de proteínas y la linealidad del gradiente de pH.
¿Qué es el enfoque isoeléctrico?
El enfoque isoeléctrico es una técnica que separa diferentes moléculas en función de su punto isoeléctrico. También se conoce como electroenfoque. Esta técnica se utiliza a menudo para la separación de proteínas en un gel. En el enfoque isoeléctrico, la muestra se agrega a geles de gradiente de pH inmovilizado (IPG). El gel IPG es una matriz de gel de acrilamida copolimerizada con un gradiente de pH. Las proteínas migran hacia el cátodo hasta encontrar la región de pH de sus puntos isoeléctricos. Cuando una proteína alcanza el pH que no tiene carga neta, la migración cesa y da una banda estacionaria. Asimismo, cada proteína da una banda en un punto del gradiente de pH correspondiente a su punto isoeléctrico.
Figura 01: Enfoque isoeléctrico
El enfoque isoeléctrico es el primer paso de la electroforesis en gel bidimensional. En esa técnica, las proteínas se separan primero de acuerdo con sus puntos isoeléctricos por enfoque isoeléctrico y luego se separan por su peso molecular a través de SDS-PAGE.
¿Cuáles son las similitudes entre el cromatoenfoque y el enfoque isoeléctrico?
- El cromatoenfoque y el enfoque isoeléctrico son dos métodos de alta resolución.
- Ambos se basan en el punto isoeléctrico de las proteínas.
- Estas técnicas utilizan un gradiente de pH.
- Ambos procedimientos son informativos para la caracterización de variantes de hemoglobina humana.
- Pueden resolver moléculas en las que los valores de pI difieren en tan solo 0,02 unidades de pH.
¿Cuál es la diferencia entre el cromatoenfoque y el enfoque isoeléctrico?
Chromatofocusing es una técnica de cromatografía en columna de alta resolución que separa las proteínas según su punto isoeléctrico. Por el contrario, el enfoque isoeléctrico es una técnica electroforética que separa las proteínas según su punto isoeléctrico mediante la aplicación de un campo eléctrico a lo largo de un gradiente de pH formado en un capilar. Entonces, esta es la diferencia clave entre el cromatoenfoque y el enfoque isoeléctrico.
Otra diferencia entre el cromatoenfoque y el enfoque isoeléctrico es que el cromatoenfoque no implica un campo eléctrico, mientras que el enfoque isoeléctrico necesita un campo eléctrico.
Resumen: cromatoenfoque frente a enfoque isoeléctrico
El enfoque cromático y el enfoque isoeléctrico son dos técnicas similares que tienen una alta capacidad de resolución de moléculas, especialmente moléculas muy similares. El cromatoenfoque es una técnica de cromatografía en columna de alta resolución, mientras que el enfoque isoeléctrico es un método de electroforesis. El cromatoenfoque no implica un campo eléctrico, a diferencia del enfoque isoeléctrico. Por lo tanto, esto resume la diferencia entre el enfoque cromático y el enfoque isoeléctrico.
