Diferencia clave: gel de apilamiento y gel de separación
Los términos gel de apilamiento y gel de separación se utilizan para explicar la técnica SDS-PAGE. SDS-PAGE o electroforesis en gel de dodecilsulfato de sodio-poliacrilamida es una técnica de laboratorio que se utiliza para separar moléculas de proteínas en función de sus pesos moleculares. La teoría detrás de la técnica es que las proteínas con diferentes pesos moleculares muestran diferentes tasas de migración; Las moléculas de bajo peso molecular migran más rápido, mientras que las moléculas de alto peso molecular migran lentamente. El medio para la migración es un gel. Hay dos tipos de geles llamados gel de apilamiento y gel de separación. La diferencia clave entre el gel de apilamiento y el gel de separación es que el pH del gel de apilamiento es 6,8 mientras que el pH del gel de separación es 8,8.
¿Qué es el gel de apilamiento?
El gel de apilamiento es un gel de poliacrilamida de baja concentración que se coloca encima de un gel de resolución más concentrado (gel separador) en la técnica SDS-PAGE. El gel de apilamiento se utiliza para mejorar la resolución de la electroforesis. La resolución aumenta debido a la diferencia entre las concentraciones de gel de apilamiento y gel de resolución que afectan a las proteínas de la muestra. Dado que la concentración de poliacrilamida en el gel de apilamiento es baja, el tamaño de los poros es mayor. Esto también ayuda a aumentar la separación.
El gel de apilamiento es un gel de poliacrilamida suelto con poros grandes que contienen aproximadamente un 7 % de poliacrilamida. Estos poros no actúan como una barrera considerable para las moléculas de proteína grandes. Por lo tanto, este gel afecta ligeramente la movilidad de esas proteínas. Esto hace la separación según la movilidad y el tamaño de la proteína concentrándolos entre dos geles.
Figura 01: Gel de acrilamida SDS-PAGE
El pH del gel de apilamiento es de 6,8. Su pH es más ácido que el del gel de resolución por 2 unidades de pH. Este pH implica una menor fuerza iónica y por lo tanto una mayor resistencia eléctrica. Esto provoca la movilidad de las proteínas más que otras partículas cargadas presentes en el gel.
¿Qué es el gel separador?
El gel de separación o gel de resolución de una técnica SDS-PAGE es un gel de poliacrilamida altamente concentrado que se coloca encima de un gel de apilamiento de baja concentración. El gel separador contiene una gran cantidad de poliacrilamida (10%). El pH de este gel se mantiene como pH=8,8, que es un nivel de pH más alto que el del gel de apilamiento.
Figura 02: Aparato de electroforesis en gel
Cuando las moléculas de proteína llegan al gel de separación, la migración de esas moléculas se ralentiza porque el gel de separación es un gel de alta concentración con un tamaño de poro pequeño que puede actuar como una barrera considerable para el movimiento de las moléculas de proteína. Esta desaceleración permite que las otras proteínas migren lentamente para ponerse al día, lo que da como resultado una banda estrecha y concentrada entre los dos geles.
¿Cuál es la relación entre el gel apilador y el gel separador?
Tanto el gel de apilamiento como el gel de separación se utilizan en el mismo aparato
¿Cuál es la diferencia entre el gel de apilamiento y el gel de separación?
Gel de apilamiento frente a Gel de separación |
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| El gel de apilamiento es un gel de poliacrilamida de baja concentración que se coloca encima de un gel de resolución más concentrado (gel separador) en la técnica SDS-PAGE. | El gel de separación o gel de resolución de una técnica SDS-PAGE es un gel de poliacrilamida altamente concentrado que se coloca encima de un gel de apilamiento de baja concentración. |
| Colocación | |
| El gel de apilamiento se coloca sobre el gel de resolución (separación). | El gel de separación se coloca en el fondo del recipiente utilizado para la electroforesis en gel. |
| Concentración | |
| La concentración de gel de apilamiento es alta. | La concentración de gel separador es baja. |
| Contenido de poliacrilamida | |
| El gel de apilamiento contiene aproximadamente un 7 % de poliacrilamida. | El gel separador contiene aproximadamente un 10 % de poliacrilamida. |
| pH | |
| El pH del gel de apilamiento es 6,8. | El pH del gel separador es 8,8. |
| Tamaño del poro | |
| Los poros grandes están presentes en el gel de apilamiento. | Los poros de tamaño pequeño están presentes en el gel separador. |
| Resolución | |
| El gel de apilamiento ofrece una mejor resolución. | El gel separador da una mala resolución. |
Resumen: gel de apilamiento frente a gel separador
El gel de apilamiento y el gel de separación son dos tipos de geles de poliacrilamida que se utilizan para obtener una mejor separación de las moléculas de proteína en una muestra determinada. La diferencia entre el gel de apilamiento y el gel de separación es que el pH del gel de apilamiento es 6,8 mientras que el pH del gel de separación es 8,8.
