Diferencia clave: Phusion frente a Taq polimerasa
Las ADN polimerasas son enzimas ampliamente utilizadas en técnicas de biología molecular y también están presentes de forma natural en todos los organismos que se someten a la replicación del ADN. Son las enzimas polimerizantes clave que intervienen durante la replicación. La ADN polimerasa es capaz de agregar nucleótidos al extremo 3 'libre de la cadena de ADN, lo que provoca la extensión de una nueva cadena. En la actualidad, debido a los avances de la biología molecular en el diagnóstico de enfermedades y aplicaciones industriales, es importante fabricar polimerasas que tengan diversas propiedades beneficiosas. Esto aumenta la precisión del método y lo convierte en una técnica más rápida. Phusion y Taq polimerasa son dos enzimas polimerasas termoestables producidas comercialmente que se utilizan en aplicaciones moleculares especiales. Phusion es una ADN polimerasa aislada de Pyrococcus furiosus y se utiliza principalmente en experimentos de clonación para aumentar la fidelidad. Taq DNA Polymerase es la DNA polimerasa estándar utilizada en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y se aísla de la bacteria termoestable; Thermus aquaticus. La diferencia clave entre las dos enzimas es el microorganismo fuente. Phusion se aísla del extremófilo, Pyrococcus furiosus, mientras que la polimerasa Taq se aísla del termófilo, Thermus aquaticus.
¿Qué es Phusion?
La ADN polimerasa Phusion es una polimerasa novedosa que se fabrica aislando la enzima de Pyrococcus furiosus, que es una arquea extremófila. Estos microbios residen en condiciones de temperatura extremadamente alta, lo que convierte a la polimerasa en una polimerasa altamente termoestable. La polimerasa Phusion se utiliza para obtener una fidelidad extrema sobre la polimerasa termoestable convencional; Taq polimerasa. La polimerasa Phusion es capaz de amplificar plantillas largas de hasta 7,5 kb de ADN genómico. La capacidad de polimerización óptima de la polimerasa Phusion es a 720 C. Phusion también se utiliza en productos de clonación para secuenciación, análisis de expresión y análisis de mutaciones.
Phusion ADN polimerasa tiene la actividad de exonucleasa 3' - 5'. Esto permite la revisión de la hebra recién sintetizada después de la síntesis. Por lo tanto, los desajustes de nucleótidos se reparan fácilmente. Por lo tanto, tiene una menor tasa de error. Las ventajas generales de la polimerasa Phusion son:
- Fidelidad extrema
- Alta velocidad y tiempo de extensión reducido
- Reacciones robustas y requiere una optimización mínima
- Alto rendimiento
Figura 01: Phusión
La principal desventaja de la polimerasa Phusion es que se inhibe en presencia de trifosfato de desoxiuridina (dUTP). Cuando los dUTP se acumulan en la mezcla de reacción, pueden inhibir las acciones de la polimerasa Phusion. Esto se evita tratando la mezcla de reacción con dUTPase antes de agregar la enzima. En la actualidad, se utiliza una variante resistente a dUTP de la polimerasa Phusion conocida como Pfu Turbo en lugar de la polimerasa Phusion como solución a este problema.
¿Qué es la polimerasa Taq?
La invención de la ADN polimerasa Taq ha revolucionado el campo de la biología molecular. Resolvió un problema importante en la amplificación del ADN. La ADN polimerasa Taq es una enzima polimerasa termoestable extraída y aislada de la bacteria termófila Thermus aquaticus. El descubrimiento de estas enzimas conduce al desarrollo de la PCR. Esta enzima ha permitido el uso de la reacción en cadena de la polimerasa en la amplificación del ADN en lugar de las laboriosas técnicas de clonación convencionales. La PCR ahora se usa en diagnósticos moleculares, campos agrícolas e industriales con muchas variaciones nuevas añadidas a la técnica.
Figura 02: Taq polimerasa
La ADN polimerasa
Taq funciona en el rango de temperatura óptimo entre 720C y 800C. La ADN polimerasa Taq requiere un cofactor; magnesio para su función. La polimerasa Taq no tiene la capacidad de corrección de 3' a 5', por lo tanto, la tasa de error de la polimerasa de ADN Taq es alta en comparación con tipos más nuevos de polimerasas de ADN como la polimerasa Phusion, etc. Pero, la popularidad de la polimerasa de ADN Taq sigue siendo la mismo en todo el mundo de la ciencia debido a la conveniencia y la flexibilidad de la enzima.
¿Cuáles son las similitudes entre Phusion y Taq polimerasa?
- Tanto la enzima polimerasa Phusion como la Taq son enzimas polimerizantes capaces de agregar nucleótidos al extremo 3' libre de la cadena de ADN.
- Tanto la polimerasa Phusion como la Taq requieren una secuencia de cebador para iniciar la polimerización.
- Tanto las polimerasas Phusion como Taq son termoestables.
- Tanto las polimerasas Phusion como Taq se utilizan en los mecanismos de PCR para amplificar el ADN.
- Al agregar la polimerasa a la mezcla de reacción, las polimerasas Phusion y Taq se agregan en último lugar para garantizar la eficiencia de la enzima.
- Tanto las polimerasas Phusion como Taq se sintetizan comercialmente con fines experimentales de biología molecular.
- Tanto las polimerasas Phusion como Taq requieren un cofactor para completar su función.
¿Cuál es la diferencia entre Phusion y Taq polimerasa?
Phusion frente a Taq polimerasa |
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| Phusion es una ADN polimerasa aislada de Pyrococcus furiosus y se utiliza principalmente en experimentos de clonación para aumentar la fidelidad. | La ADN polimerasa Taq es la ADN polimerasa estándar utilizada en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y está aislada de la bacteria termoestable Thermus aquaticus. |
| Organismo de origen | |
| Phusion se extrae de arqueas extremófilas: Pyrococcus furiosus. | Estas obras literarias abarcan desde el período de colonización hasta el período de descolonización. |
| Capacidad de corrección de pruebas | |
| 3’ – La capacidad de lectura de prueba de 5’ está presente en Phusion. | 3’ – La capacidad de lectura de prueba de 5’ está ausente en la polimerasa Taq. |
| Fidelidad | |
| La alta fidelidad está ahí con Phusion. | La polimerasa Taq muestra baja fidelidad. |
| Amplificación | |
| Phusion es capaz de amplificar fragmentos largos de ADN. | La polimerasa Taq es capaz de amplificar fragmentos de ADN mucho más cortos. |
| envenenamiento por dUTP | |
| La acción de Phusion es inhibida por la impar de acumulación. | La polimerasa Taq no es inhibida por dUPT. |
Resumen: Phusion frente a Taq polimerasa
Phusion y Taq DNA polimerasa son dos polimerasas termoestables que se utilizan en las técnicas de PCR. Phusion es una polimerasa aislada del extremófilo Pyrococcus furiosus, mientras que Taq está aislada de la bacteria termoestable Thermus aquaticus. El descubrimiento de la ADN polimerasa Taq conduce a la invención de la PCR. Phusion tiene muchas ventajas sobre Taq que han hecho de Phusion una mejor opción para producir ADN de alta fidelidad. Sin embargo, la polimerasa Taq todavía se usa como la enzima polimerasa estándar en PCR. Esta es la diferencia entre la polimerasa Phusion y la Taq.
