Diferencia clave: tinción de Gram frente a acidorresistente
Las bacterias son microorganismos muy pequeños. Son transparentes y su detección es difícil en condiciones vivas y sin teñir. Por lo tanto, se desarrollan varios métodos de tinción para facilitar la detección bacteriana. Hay tres tipos principales de técnicas de tinción: tinción simple, tinción diferencial y tinción estructural. La tinción diferencial es una técnica que utiliza más de una tinción para diferenciar bacterias. La tinción de Gram y la tinción acidorresistente se conocen popularmente como tinciones diferenciales. La tinción de Gram es una técnica de tinción diferencial, que separa las bacterias en dos grupos conocidos como bacterias grampositivas y bacterias gramnegativas. La tinción acidorresistente es una tinción diferencial utilizada para identificar organismos acidorresistentes como Mycobacterium de organismos no acidorresistentes. Esta es la diferencia clave entre la tinción de Gram y la tinción ácida rápida.
¿Qué es la tinción de Gram?
La tinción de Gram es una importante técnica de tinción diferencial utilizada para la identificación bacteriana en microbiología. Esta técnica fue introducida por el bacteriólogo danés Hans Christian Gram en 1884. La tinción de Gram clasifica las bacterias en dos grupos principales llamados grampositivos y gramnegativos, que son muy importantes en la clasificación e identificación bacteriana. Los microbiólogos realizan la tinción de Gram como un paso inicial en la caracterización bacteriana durante sus estudios.
Las bacterias se agrupan según las diferencias en su pared celular. Las bacterias grampositivas se componen de una capa gruesa de peptidoglicano en su pared celular, mientras que las bacterias gramnegativas se componen de una capa delgada de peptidoglicano en su pared celular. El resultado de la tinción de Gram se basará en la diferencia en el grosor de la capa de peptidoglicano de la pared celular.
La tinción de Grams se realiza utilizando cuatro reactivos diferentes, a saber; colorante primario, mordiente, agente decolorante y colorante de contraste. El cristal violeta y la safranina se utilizan como colorante primario y de contraste, respectivamente, mientras que se utilizan gramos de yodo y alcohol al 95 % como mordiente y decolorante, respectivamente. Los pasos básicos de la tinción de gramos son los siguientes:
- Se prepara un frotis bacteriano en un portaobjetos de vidrio limpio, se fija con calor y se enfría.
- El frotis se inunda con cristal violeta durante 1 o 2 minutos.
- La mancha se enjuaga con agua corriente del grifo lentamente para eliminar el exceso de manchas.
- Se aplican gramos de yodo al frotis durante 1 minuto.
- El frotis se enjuaga con agua del grifo corriendo lentamente
- El frotis se lava con alcohol al 95 % durante 2 a 5 segundos y se enjuaga con agua del grifo a baja velocidad.
- El frotis se contrasta con safranina durante 1 minuto
- El frotis se enjuaga con agua corriente del grifo, se seca y se observa bajo el microscopio.
Al final de la tinción de Gram, las bacterias gram negativas se observarán de color rosa mientras que las bacterias gram positivas se observarán de color púrpura.
Figura 01: bacterias Gram negativas y Gram positivas
El resultado de la tinción de Gram se decide por el espesor de la capa de peptidoglicano en su pared celular. Durante el paso de decoloración, la tinción primaria y el mordiente se eliminan fácilmente de las bacterias gram negativas y se vuelven incoloros ya que tienen una capa delgada de peptidoglicano. La tinción primaria se retiene en las bacterias grampositivas ya que tienen una capa gruesa de peptidoglicano. La contratinción no será eficaz para las bacterias grampositivas debido a la retención de la tinción primaria. Por lo tanto, las bacterias Gram positivas serán visibles en el color de la mancha primaria, es decir, el color púrpura. La contratinción teñirá las bacterias gram negativas, y serán visibles en un color pico, que es el color de la safranina. Por lo tanto, es fácil categorizar las bacterias en dos grupos mediante tinción de Gram y es valioso en la diferenciación e identificación bacteriana.
¿Qué es la acidez rápida?
La resistencia a los ácidos es una propiedad física de ciertas bacterias, específicamente su resistencia a la decoloración por ácidos durante los procedimientos de tinción. Una vez teñidos, estos organismos resisten los procedimientos de decoloración basados en ácido diluido o etanol comunes en muchos protocolos de tinción. Por lo tanto, el nombre de "ácido resistente" se le da a esos organismos. Esta propiedad se manifiesta por tener un alto nivel de material ceroso (ácidos micólicos) en sus paredes celulares. Esta prueba es crítica para la identificación de Mycobacterium tuberculosis.
Figura 2: Micobacterias acidorresistentes
Esta tinción ácida resistente fue desarrollada por Paul Ehrlich en 1882. La técnica ácida resistente de Ehrlich fue modificada por Ziehl-Neelsen y ahora se usa con más frecuencia. El procedimiento de tinción ácido rápida involucra tres reactivos diferentes. Carbol fuschin se utiliza como colorante primario. El alcohol ácido se utiliza como agente decolorante. El azul de metileno se utiliza como tinción de contraste. El procedimiento de tinción se realiza de la siguiente manera.
- La tinción primaria (carbol fucsina) se aplica a la muestra fijada en el portaobjetos (todas las células se tiñen de color rojo).
- El portaobjetos se calienta con vapor durante 5 minutos, lo que hace que las manchas penetren correctamente en las células.
- Luego se agrega la solución decolorante (esto elimina el tinte rojo de todas las células excepto las bacterias ácidas resistentes).
- El azul de metileno se agrega como colorante de contraste (colorea todas las células bacterianas decoloradas).
- Las bacterias acidorresistentes permanecen rojas mientras que las bacterias no acidorresistentes se tiñen de azul.
¿Cuáles son las similitudes entre la tinción de Gram y el ácido resistente?
- La tinción de Gram y el ácido rápido son dos técnicas de tinción diferenciales.
- Ambas técnicas clasifican las bacterias en dos grupos.
- Ambas técnicas utilizan dos tintes y un decolorante.
¿Cuál es la diferencia entre la tinción de Gram y el ácido resistente?
Tinción de Gram frente a ácido rápido |
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| La tinción de Gram es una técnica de tinción diferencial que separa las bacterias en dos grupos: bacterias grampositivas y bacterias gramnegativas. | La tinción ácido-resistente es una tinción diferencial que se utiliza para identificar organismos ácido-resistentes de organismos no ácidos-resistentes. |
| Tinción primaria | |
| El cristal violeta es el colorante primario más utilizado en la tinción de Gram. | La fucsina de carbol es el principal colorante que se utiliza en los ácidos resistentes. |
| Agente decolorante | |
| El alcohol al 95 % se utiliza como agente decolorante en la tinción de Gram. | El alcohol ácido se utiliza como agente decolorante en ayunas. |
| Contador de manchas | |
| La tinción de Gram usa safranina como contratinción. | La tinción acidorresistente utiliza azul de metileno como contratinción. |
| Observación | |
| Las bacterias Gram negativas se observan en color pico y las bacterias Gram positivas se observan en color púrpura. | Las bacterias acidorresistentes se observan en color rojo y las bacterias no acidorresistentes se observan en color azul. |
Resumen: tinción de Gram frente a acidorresistente
La visualización de microorganismos en estado vivo es difícil. Por lo tanto, las tinciones biológicas y los procedimientos de tinción se utilizan ampliamente para estudiar sus propiedades. La tinción diferencial es un tipo de técnica de tinción utilizada para diferenciar bacterias. La tinción de Gram y la tinción acidorresistente son dos técnicas de tinción diferenciales. La tinción de Gram diferencia las bacterias gram negativas de las bacterias gram positivas en función del grosor de sus paredes celulares. La tinción acidorresistente diferencia las bacterias acidorresistentes de las bacterias no acidorresistentes en función del contenido de ácido micólico en la pared celular. Esta es la diferencia entre el ácido resistente y la tinción de Gram.
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